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金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】酶切失败分析已有9人参与

用BstXI（最适温度45）和EcoRI（最适温度37）双酶切pFL61载体,结果切不动，麻烦帮忙分析一下原因。

BstXI：1

EcoRI：1

10*Hbuffer：2

质粒：5

水：11

总体系：20

酶切条件：先在37°酶切3小时，再于45°酶切3小时。

1楼2010-04-08 22:55:03

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-08 23:37

H buffer是这两个酶双酶切时的公用buffer么？
你能否把你电泳图上的样品各是什么样品标示一下？
如果最左边的第一个是未切前的载体，后几个是切后的样品，那么从分子量之间的差异，感觉你的载体已经切开了。你要切下多大的片段啊？

3楼2010-04-08 23:13:11

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