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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酶切失败分析
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xiaomu3811

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】酶切失败分析 已有9人参与

用BstXI（最适温度45）和EcoRI（最适温度37）双酶切pFL61载体,结果切不动，麻烦帮忙分析一下原因。

BstXI：1

EcoRI：1

10*Hbuffer：2

质粒：5

水：11

总体系：20

酶切条件：先在37°酶切3小时，再于45°酶切3小时。
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1楼 2010-04-08 22:55:03
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★ ★
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1949stone(金币+2): 2010-04-09 10:32
表达不完全，切开了能切下多大的片段啊？
建议首先加EcoRI，37℃反应俩个小时后，补加BstXI然后45℃反应两个小时；
要是效果还是不好的话，只能是单酶切回收后再用另一种酶
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2010-04-09 08:52:36
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DNAhelix

银虫 (著名写手)
★ ★
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scelab(金币+1):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-08 23:37
是切空载？
看到右边两条亮带的带型，感觉被切了。
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智慧活法：不生气，不计较！
2楼2010-04-08 23:08:06
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1110rainjob

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
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scelab(金币+2):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-08 23:37
H buffer是这两个酶双酶切时的公用buffer么？
你能否把你电泳图上的样品各是什么样品标示一下？
如果最左边的第一个是未切前的载体，后几个是切后的样品，那么从分子量之间的差异，感觉你的载体已经切开了。你要切下多大的片段啊？
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3楼2010-04-08 23:13:11
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快乐由自己go

银虫 (小有名气)
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1949stone(金币+2): 2010-04-09 10:32
把各个泳道的样品标明一下吧。如果图片可以旋转180度，会更方便看些。关注中……
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5楼2010-04-09 09:04:58
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