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汕头大学海洋科学接受调剂
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humants

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】高保真酶PFU扩不出来 已有5人参与

我的目的条带是1kb,由于用rTaq出现突变,所以购买了promega的pfu,但是怎么也扩增不出来。所有的试剂用rTaq都没问题,梯度也做了。实在不知道什么原因。


在实验中发现有的PCR小管在结束反应后,液体竟然没有了,是不是在反应的时候应该加矿物油油封?我们的PCR仪式盖加热。
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DNAhelix

银虫 (著名写手)


humants(金币+1):谢谢参与
scelab:这办法可行! 2010-04-06 13:16
实在不行,Taq与Pfu混在一起p吧!
智慧活法:不生气,不计较!
5楼2010-04-06 10:12:12
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gaozx123

金虫 (小有名气)

★ ★
humants(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1): 2010-04-06 09:18
换酶了,缓冲液也要换成相应的缓冲液;还有pfu与taq酶的扩增效率不同,也就是变性,退火的时间需要做改变,pfu由于高保真,所以扩增较慢,需要相应的延长时间。
2楼2010-04-06 08:45:28
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
humants(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1): 2010-04-06 09:18
pfu酶有的时候是不太好做,如楼上所说程序要改变,另外退火温度降一点。
至于飞样问题,是你的小管质量太次,买好一点的就好了,不用矿物油
3楼2010-04-06 09:00:44
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j2

木虫 (正式写手)


humants(金币+1):谢谢参与
scelab:祝你早日成仙:tiger23: 2010-04-06 13:17
pfu退火温度要低些吧,做个梯度试试
在不ls的办法不错~
修炼ing,当虫仙……
6楼2010-04-06 13:10:31
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