24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 723  |  回复: 5
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 humants 的 5 个金币 ,回帖就立即获得 1 个金币,每人有 1 次机会
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

humants

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】高保真酶PFU扩不出来 已有5人参与

我的目的条带是1kb,由于用rTaq出现突变,所以购买了promega的pfu,但是怎么也扩增不出来。所有的试剂用rTaq都没问题,梯度也做了。实在不知道什么原因。


在实验中发现有的PCR小管在结束反应后,液体竟然没有了,是不是在反应的时候应该加矿物油油封?我们的PCR仪式盖加热。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)


humants(金币+1):谢谢参与
scelab:祝你早日成仙:tiger23: 2010-04-06 13:17
pfu退火温度要低些吧,做个梯度试试
在不ls的办法不错~
修炼ing,当虫仙……
6楼2010-04-06 13:10:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

gaozx123

金虫 (小有名气)

★ ★
humants(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1): 2010-04-06 09:18
换酶了,缓冲液也要换成相应的缓冲液;还有pfu与taq酶的扩增效率不同,也就是变性,退火的时间需要做改变,pfu由于高保真,所以扩增较慢,需要相应的延长时间。
2楼2010-04-06 08:45:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
humants(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1): 2010-04-06 09:18
pfu酶有的时候是不太好做,如楼上所说程序要改变,另外退火温度降一点。
至于飞样问题,是你的小管质量太次,买好一点的就好了,不用矿物油
3楼2010-04-06 09:00:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

DNAhelix

银虫 (著名写手)


humants(金币+1):谢谢参与
scelab:这办法可行! 2010-04-06 13:16
实在不行,Taq与Pfu混在一起p吧!
智慧活法:不生气,不计较!
5楼2010-04-06 10:12:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
提示: 如果您在30分钟内回复过其他散金贴,则可能无法领取此贴金币
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中科大材料与化工,353分还有调剂学校吗 +10 否极泰来2026 2026-04-15 12/600 2026-04-17 17:54 by mapenggao
[考研] 295分求调剂 +5 ?要上岸? 2026-04-17 5/250 2026-04-17 16:51 by fenglj492
[考研] 291求调剂 +9 关忆北. 2026-04-14 9/450 2026-04-16 22:49 by cfdbai
[考研] 22专硕求调剂 +10 haoyun上岸 2026-04-11 12/600 2026-04-16 22:21 by 猪会飞
[考研] 一志愿沪9,生物学326求调剂 +9 刘墨墨 2026-04-15 9/450 2026-04-16 17:14 by 崔崔崔cccc
[考研] 290调剂生物0860 +38 哇哈哈,。 2026-04-11 44/2200 2026-04-16 09:52 by cuisz
[考研] 279学硕食品专业求调剂院校 20+7 孤独的狼爱吃羊 2026-04-12 29/1450 2026-04-16 09:00 by screening
[考研] 求调剂推荐 +8 小聂爱学习 2026-04-14 8/400 2026-04-16 07:22 by 学员JpLReM
[考研] 求助调剂,跨调 +19 X十甫寸Y 2026-04-11 20/1000 2026-04-15 21:18 by cuisz
[考研] 药学305求调剂 +7 玛卡巴卡boom 2026-04-11 7/350 2026-04-15 13:21 by 西北望—风沙
[考研] 材料工程281还有调剂机会吗 +43 xaw. 2026-04-11 44/2200 2026-04-15 12:46 by 西北望—风沙
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-11 12/600 2026-04-14 15:37 by zs92450
[教师之家] 转长聘了 +7 简单化xn 2026-04-13 7/350 2026-04-14 14:50 by xindong
[考研] 105500药学求调剂 +4 x_skys 2026-04-12 4/200 2026-04-14 13:37 by rndfc
[考研] 300分求调剂 (085501机械专硕,本科扬大) +9 xu@841019 2026-04-11 10/500 2026-04-14 08:48 by 木木mumu~
[考研] 346分,工科0854求调剂,专硕 +6 moser233 2026-04-12 7/350 2026-04-12 22:11 by fqwang
[考研] 339求调剂 +8 hanwudada 2026-04-11 9/450 2026-04-12 15:36 by laoshidan
[考研] 270求调剂 +14 杨乐369 2026-04-11 14/700 2026-04-11 20:16 by 蓝云思雨
[考研] 283求调剂 086004考英二数二 +17 那个噜子 2026-04-10 18/900 2026-04-11 16:27 by 明月此时有
[考研] 一志愿985机械学硕380求调剂 +5 关关雎鸠10 2026-04-11 5/250 2026-04-11 10:10 by 知念。A
信息提示
请填处理意见