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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】高保真酶PFU扩不出来
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humants

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】高保真酶PFU扩不出来 已有5人参与

我的目的条带是1kb，由于用rTaq出现突变，所以购买了promega的pfu，但是怎么也扩增不出来。所有的试剂用rTaq都没问题，梯度也做了。实在不知道什么原因。


在实验中发现有的PCR小管在结束反应后，液体竟然没有了，是不是在反应的时候应该加矿物油油封？我们的PCR仪式盖加热。
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1楼 2010-04-06 08:31:45
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gaozx123

金虫 (小有名气)
★ ★
humants(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1): 2010-04-06 09:18
换酶了，缓冲液也要换成相应的缓冲液；还有pfu与taq酶的扩增效率不同，也就是变性，退火的时间需要做改变，pfu由于高保真，所以扩增较慢，需要相应的延长时间。
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2楼2010-04-06 08:45:28
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
humants(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1): 2010-04-06 09:18
pfu酶有的时候是不太好做，如楼上所说程序要改变，另外退火温度降一点。
至于飞样问题，是你的小管质量太次，买好一点的就好了，不用矿物油
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3楼2010-04-06 09:00:44
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
humants(金币+1):谢谢参与
怀疑操作问题
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4楼2010-04-06 09:49:35
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DNAhelix

银虫 (著名写手)
★
humants(金币+1):谢谢参与
scelab:这办法可行! 2010-04-06 13:16
实在不行，Taq与Pfu混在一起p吧！
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智慧活法：不生气，不计较！
5楼2010-04-06 10:12:12
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j2

木虫 (正式写手)
★
humants(金币+1):谢谢参与
scelab:祝你早日成仙:tiger23: 2010-04-06 13:17
pfu退火温度要低些吧，做个梯度试试
在不ls的办法不错~
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
6楼2010-04-06 13:10:31
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