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【求助/交流】紧急求助!关于细菌总DNA提取与16SRDNA的PCR问题! 已有6人参与
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我做的是从未知细菌提取总DNA,然后16SRDNA的PCR鉴定.遇到如下问题: 问题一:在提取DNA的时候是先收集4ml菌液,用10μl 10mg/ml的溶菌酶+0.5 ml溶液A(10g/L无水葡萄糖 25mmol/L Tris-HCl 10mmol/L EDTA)悬浮细胞,然后加20μl蛋白酶K(20 mg/ml)轻柔混匀,就现此时溶液变成十分粘稠的胶状物,以至于后面的酚抽提的时候上清液也十分粘稠,几乎吸不出上清,甚至后面提出的DNA也是粘稠状的,电泳出来DNA扩散很大.不知道为什么会出现粘稠??? 问题二:上面总共有是个不同的样品,总DNA电泳出来看起来都差不多,但是P了许多次,只有其中一个样能P出来,不知道怎么回事? 高手们,请帮帮小弟啊,初来些论坛,没有金币........ 补充:今天我又提了一次,发现不是加了蛋白酶K的时候出现的粘稠,而是之后加了25μl的10%SDS之后马上就出现了粘稠,之后的所的步骤都有粘稠.后面提出来的DNA里都有粘稠物,并且电泳出来的DNA条带很弱.4个样品里只有一个样能很清楚的看到DNA带.....我没提出来DNA的菌是一种涂料里的污染菌,提出DNA的菌是红茶菌里的一种阳性细菌,不知道这和菌的种类是不是有关系? [ Last edited by wwsw38 on 2010-4-6 at 21:04 ] |
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