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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】有关his纯化的问题
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【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 bihaiqingt 的 8 个金币

bihaiqingt

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】有关his纯化的问题 已有5人参与

最近做蛋白纯化，用Ni-NTA Agarose过柱，wash buffer：10mM咪唑磷酸缓冲液（PH=8.0）；elution buffer：500mM咪唑磷酸缓冲液（PH=8.0）。做过几次，一直洗不下来；后来降低PH，还是不行。从蛋白结构看不出his是否折叠在内部，过柱前经活性检测，蛋白已经表达·····
       实在找不出哪地方出了纰漏，请教高手指点·····

[ Last edited by bihaiqingt on 2010-4-5 at 21:09 ]
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1楼 2010-04-05 19:56:25
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DNAhelix

银虫 (著名写手)
确定有His融合蛋白挂在柱子上？
赞一下 回复此楼
智慧活法：不生气，不计较！
2楼2010-04-05 22:29:40
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
scelab:欢迎常来交流~~~:tiger06: 2010-04-06 16:06
scelab(金币+1): 2010-04-06 16:06
bihaiqingt(金币+2):有道理，谢谢 2010-04-06 16:23
你的量大吗？
也不一定是没有洗下来吧。
0.5M咪唑已经足够将两个HIS标签洗脱下来了。
如果是折叠在蛋白内部，应该是挂不上才对，你可以测一下穿透液。
你用测活的方法检测我估计有问题，有可能纯化前有活性，洗脱下来失活了呢？建议跑个PAGE电泳看看。
赞一下(2人) 回复此楼
生物资源交流QQ群：1044518333
3楼2010-04-05 23:17:44
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
先确定你的蛋白是否已经挂上
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4楼2010-04-06 09:55:50
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mql1986

木虫 (小有名气)
同意三楼。。。
因为我上周刚刚做过His蛋白纯化。。。
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5楼2010-04-06 14:00:01
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bihaiqingt

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by DNAhelix at 2010-04-05 22:29:40:
确定有His融合蛋白挂在柱子上？

确定
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6楼2010-04-06 16:21:45
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