24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 574  |  回复: 5
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 bihaiqingt 的 8 个金币

bihaiqingt

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】有关his纯化的问题 已有5人参与

最近做蛋白纯化,用Ni-NTA Agarose过柱,wash buffer:10mM咪唑磷酸缓冲液(PH=8.0);elution buffer:500mM咪唑磷酸缓冲液(PH=8.0)。做过几次,一直洗不下来;后来降低PH,还是不行。从蛋白结构看不出his是否折叠在内部,过柱前经活性检测,蛋白已经表达·····
       实在找不出哪地方出了纰漏,请教高手指点·····

[ Last edited by bihaiqingt on 2010-4-5 at 21:09 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

DNAhelix

银虫 (著名写手)

确定有His融合蛋白挂在柱子上?
智慧活法:不生气,不计较!
2楼2010-04-05 22:29:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)


scelab:欢迎常来交流~~~:tiger06: 2010-04-06 16:06
scelab(金币+1): 2010-04-06 16:06
bihaiqingt(金币+2):有道理,谢谢 2010-04-06 16:23
你的量大吗?
也不一定是没有洗下来吧。
0.5M咪唑已经足够将两个HIS标签洗脱下来了。
如果是折叠在蛋白内部,应该是挂不上才对,你可以测一下穿透液。
你用测活的方法检测我估计有问题,有可能纯化前有活性,洗脱下来失活了呢?建议跑个PAGE电泳看看。
VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
3楼2010-04-05 23:17:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

先确定你的蛋白是否已经挂上
4楼2010-04-06 09:55:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mql1986

木虫 (小有名气)

同意三楼。。。
因为我上周刚刚做过His蛋白纯化。。。
5楼2010-04-06 14:00:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bihaiqingt

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by DNAhelix at 2010-04-05 22:29:40:
确定有His融合蛋白挂在柱子上?

确定
6楼2010-04-06 16:21:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 bihaiqingt 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 291求调剂 +3 关忆北. 2026-04-14 3/150 2026-04-14 22:53 by 梁家伟
[考研] 材料工程085601,270求调剂 +42 @ASDF1234 2026-04-08 46/2300 2026-04-14 18:12 by 逍遥三郎
[考研] 272分材料子求调剂 +41 Loy0361 2026-04-10 54/2700 2026-04-14 18:00 by lhj2009
[考研] 297工科调剂? +13 河南农业大学-能 2026-04-13 13/650 2026-04-14 16:46 by Art1977
[考研] 农学0904 312求调剂 +4 Say Never 2026-04-11 4/200 2026-04-14 09:10 by zs92450
[考研] 材料085601调剂 +32 何润采123 2026-04-10 34/1700 2026-04-14 08:47 by 木木mumu~
[考研] 一志愿哈工大 085600 277 12材科基求调剂 5+5 chenny174 2026-04-10 37/1850 2026-04-14 07:39 by Abskk
[考研] 一志愿华南理工大学331分材料求调剂 +10 天下ww 2026-04-09 11/550 2026-04-13 23:25 by pies112
[考研] 22专硕求调剂 +8 haoyun上岸 2026-04-11 10/500 2026-04-13 22:15 by zhq0425
[考研] 0831生医工第一轮调剂失败求助 +12 小熊睿睿_s 2026-04-11 16/800 2026-04-12 16:28 by 钰璞
[考研] 22408调剂315分 +3 zhuangyan123 2026-04-09 3/150 2026-04-12 00:25 by 蓝云思雨
[考研] 303求调剂 +14 SereinQ 2026-04-10 15/750 2026-04-11 20:43 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂 +11 翩翩一书生 2026-04-09 11/550 2026-04-11 19:57 by 逆水乘风
[考研] 本人女孩 +7 吼吼, 2026-04-10 9/450 2026-04-11 14:45 by ACS Nano——
[考研] 346,工科0854求调剂,专硕 +7 moser233 2026-04-10 8/400 2026-04-11 08:52 by 猪会飞
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +3 LZH(等待调剂中 2026-04-09 3/150 2026-04-09 21:29 by wutongshun
[考研] 083200 初试305分 求调剂 暂不考虑跨专业 +15 Claireyyyy 2026-04-09 15/750 2026-04-09 16:11 by zhuimr
[考研] 二次调剂求老师收留 +3 笑笑袁 2026-04-08 3/150 2026-04-08 23:50 by 醉在风里
[考研] 软件工程求调剂22软工296分求调剂,接受跨调 +4 yangchen2017 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:56 by 土木硕士招生
[考研] 生物学学硕,初试351分,求调剂 +4 …~、王…~ 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:49 by limeifeng
信息提示
请填处理意见