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lzzsdr123

金虫 (小有名气)

[交流] 【交流】求助凝胶电泳疑惑 已有4人参与

该图是跑胶的结果,中间黑色的是溴酚蓝的条带,但是发现DNA比溴酚蓝跑的距离近好多。第一排共11个样品,第一个是裸DNA的,看不出有跑的迹象,第四、六、九、十一个是DNA应跑出来的,貌似也是像要出来的样子,但是只跑了一点,实验结果不能用,请各位大侠指点一下原因。跑了几次都是这个样子。
我的胶的浓度是1.5%,电压是130v,时间50min,然后EB染色,漂洗掉EB后去看的,结果很失望。
[img][/img]
第二次跑胶结果如下像下图,第四、九条带是复合DNA后被破环应该DNA出来的,加样孔里是看不到DNA了,但是也没有像第一和最后一个裸DNA 跑出来的样子,不知道DNA 跑到哪里去了,麻烦各位大侠帮忙。

[ Last edited by lzzsdr123 on 2010-4-17 at 08:28 ]
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firebolt

铁杆木虫 (著名写手)

★
zhangwj(金币+1):谢谢应助 2010-04-01 11:08
lzzsdr123(金币+2): 2010-04-06 11:24
lzzsdr123(金币+1): 2010-04-17 08:29
质粒多大?胶有些浓吧
我们的质粒5600bp,胶浓度1%,1xTAE,100v,45min
DNA跑的确实是比指示剂慢好多,另外可以在配胶时把EB加到胶中试试,效果应该会好一些,在有你这个成像系统的效果也不好
2楼2010-04-01 11:05:05
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王庭

木虫 (著名写手)

lzzsdr123(金币+1): 2010-04-06 11:24
lzzsdr123(金币+1): 2010-04-17 08:29
DNA跑不动,琼脂加的量太大了。
努力做最好的自己!!
3楼2010-04-02 16:37:39
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lzzsdr123

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by firebolt at 2010-04-01 11:05:05:
质粒多大?胶有些浓吧
我们的质粒5600bp,胶浓度1%,1xTAE,100v,45min
DNA跑的确实是比指示剂慢好多,另外可以在配胶时把EB加到胶中试试,效果应该会好一些,在有你这个成像系统的效果也不好

对于质粒是多少bp不清楚,质粒是扩他们扩增的,本身是化学专业的,对此也不是很明白。bp的大小对跑胶结果也有什么影响吗?
4楼2010-04-06 12:45:47
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firebolt

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
yusen_1982(金币+1):欢迎讨论!! 2010-04-19 20:37
引用回帖:
Originally posted by lzzsdr123 at 2010-04-06 12:45:47:

对于质粒是多少bp不清楚,质粒是扩他们扩增的,本身是化学专业的,对此也不是很明白。bp的大小对跑胶结果也有什么影响吗?

质粒越大跑得越慢啊,把胶配稀一些
5楼2010-04-17 14:26:28
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liouwzh

木虫 (正式写手)

★
americanyk(金币+1):tks 2010-07-09 10:54:43
溴酚蓝大概相当于300bp左右。胶的浓度可降低,1-1.2%都可以。同时你的复合DNA有没有可能被降级了,不知道你的处理方法是如何。
6楼2010-07-09 11:44:25
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Limei!

新虫 (初入文坛)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
为什么要把EB洗去呢,我做琼脂糖凝胶电泳的时候都是直接曝光的,不过我们是在配胶的时候直接加上EB的,效果也挺好的
7楼2014-02-21 09:48:47
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