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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】taq酶 加A
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huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】taq酶 加A

我用PFU酶做PCR，最后想加A，用的是dNTP,能保证最后加的是A吗？不是很明白啊，有哪位高手指点一下～～谢谢
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1楼 2010-03-30 18:25:33
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
Originally posted by huangdi07 at 2010-03-30 18:25:33:
我用PFU酶做PCR，最后想加A，用的是dNTP,能保证最后加的是A吗？不是很明白啊，有哪位高手指点一下～～谢谢

可以的，最好是将产物纯化一下，然后用dNTP或者dATP，都可以的，用taq酶半小时，不提倡在反应体系中直接加taq，因为pfu还是会将加A尾切掉
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
7楼2010-03-30 23:48:43
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-31 08:35
taq酶 的特性就是加A,不加别的.
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2楼2010-03-30 21:17:32
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-31 08:35
肯定不行。
好像是在反应里添加一些Taq酶就可以了
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3楼2010-03-30 21:18:37
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-31 08:36
the protocol is following:
1. Use 1–2μl of the DNA fragment.
2. Add 1μl of Taq DNA Polymerase Reaction 10X Buffer.
3. Add 1μl of 25mM MgCl2
4. Add dATP to a final concentration of 0.2mM.
5. Add 5 units of Taq DNA Polymerase.
6. Add Nuclease-Free Water to a final volume of 10μl.
7. Incubate at 70°C for 30 minutes.
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会当凌绝顶，一览众山小
4楼2010-03-30 21:48:52
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