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huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】taq酶 加A

我用PFU酶做PCR,最后想加A,用的是dNTP,能保证最后加的是A吗?不是很明白啊,有哪位高手指点一下~~谢谢
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-31 08:36
the protocol is following:
1. Use 1–2μl of the DNA fragment.
2. Add 1μl of Taq DNA Polymerase Reaction 10X Buffer.
3. Add 1μl of 25mM MgCl2
4. Add dATP to a final concentration of 0.2mM.
5. Add 5 units of Taq DNA Polymerase.
6. Add Nuclease-Free Water to a final volume of 10μl.
7. Incubate at 70°C for 30 minutes.
会当凌绝顶,一览众山小
4楼2010-03-30 21:48:52
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-31 08:35
taq酶 的特性就是加A,不加别的.
2楼2010-03-30 21:17:32
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-31 08:35
肯定不行。
好像是在反应里添加一些Taq酶就可以了
3楼2010-03-30 21:18:37
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)

★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-31 08:36
想做TA克隆,就要在pfu扩增后回收PCR产物,之后加Taq polymerase 以及其他的PCR反应成分,或者以dATP替代dNTP,37度温浴半小时就可以了。。。
5楼2010-03-30 23:41:10
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