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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】转化感受态细胞
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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】转化感受态细胞

我的载体9.3k，目的片段1700bp，连接后转化感受态细胞，转了n次还是平板上直接什么都不长，郁闷死了。空载体对照倒是转进去了，还挺多的，多了1.7k就转化不进去吗？望高手帮忙
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砖石王老三！！！
1楼 2010-03-29 22:28:15
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yzuxhq368

金虫 (小有名气)
jack6335(金币+1):谢谢！ 2010-03-29 22:49
恐怕是没连上
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2楼2010-03-29 22:45:07
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ddzhang@

新虫 (小有名气)
jack6335(金币+1):谢谢，感受态没问题，对照能转化出来，我估计也是连接的问题，但就是不知怎么会连不上。 2010-03-30 12:25
感受态  是否完好？   肯定是在连接  这一不  上出了问题。。你再重复连一下，认真分析每一步
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3楼2010-03-29 23:03:52
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

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优秀版主
jack6335(金币+1):呵呵，连了几次了，都不行，你说的是乙醇沉淀纯化一下？ 2010-03-30 12:27
大片段本来就不好连，多试几次，另外，可以考虑醋酸钠沉淀一下再转
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4楼2010-03-30 08:19:11
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gaozx123

金虫 (小有名气)
jack6335(金币+1):我估计也是连接的问题，就是不知怎么处理才能连接上。 2010-03-30 12:28
应该是连接出问题了。首先看一下所用载体与目的基因的酶切位点是否合适，其次看连接酶或连接体系是否有问题。
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5楼2010-03-30 08:26:32
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沙中清泉

木虫 (正式写手)
jack6335(金币+1):大肠杆菌，下一步才是酵母。 2010-03-30 12:28
转的是酵母？
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6楼2010-03-30 10:04:19
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Xingqinghai

金虫 (小有名气)
jack6335(金币+1):连接电泳是看不出来的，本来体系就小，还有个效率问题。 2010-03-30 12:29
连接之后最好做一下验证（电泳），证明确实连接上了再转就应该没为题，大一些应该不会有这么大区别。
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科研啊
7楼2010-03-30 10:11:19
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
引用回帖:
Originally posted by Xingqinghai at 2010-03-30 10:11:19:
连接之后最好做一下验证（电泳），证明确实连接上了再转就应该没为题，大一些应该不会有这么大区别。

电泳是看不到地
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8楼2010-03-30 11:38:36
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hui_student

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
jack6335(金币+1):这主意不错，我怎么就没想到呢，谢谢！ 2010-03-30 15:09
重组质粒可以用你的目的基因引物做PCR，琼脂糖凝胶看看结果，要是连上了，可以扩出结果。我一般都是这样验证连接成功后才做转化。可以试试
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一路前行！
9楼2010-03-30 15:06:02
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1110rainjob

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你这个目的基因是否转的是表达载体，如果是表达载体，有可能由于表达的目的蛋白对细胞有毒害作用等原因造成无法获得阳性克隆
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-03-30 15:40:59
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