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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】转化感受态细胞

我的载体9.3k,目的片段1700bp,连接后转化感受态细胞,转了n次还是平板上直接什么都不长,郁闷死了。空载体对照倒是转进去了,还挺多的,多了1.7k就转化不进去吗?望高手帮忙
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砖石王老三!!!
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hui_student

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
jack6335(金币+1):这主意不错,我怎么就没想到呢,谢谢! 2010-03-30 15:09
重组质粒可以用你的目的基因引物做PCR,琼脂糖凝胶看看结果,要是连上了,可以扩出结果。我一般都是这样验证连接成功后才做转化。可以试试
一路前行!
9楼2010-03-30 15:06:02
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ddzhang@

新虫 (小有名气)

jack6335(金币+1):谢谢,感受态没问题,对照能转化出来,我估计也是连接的问题,但就是不知怎么会连不上。 2010-03-30 12:25
感受态  是否完好?   肯定是在连接  这一不  上出了问题。。你再重复连一下,认真分析每一步
3楼2010-03-29 23:03:52
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

jack6335(金币+1):呵呵,连了几次了,都不行,你说的是乙醇沉淀纯化一下? 2010-03-30 12:27
大片段本来就不好连,多试几次,另外,可以考虑醋酸钠沉淀一下再转
4楼2010-03-30 08:19:11
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gaozx123

金虫 (小有名气)

jack6335(金币+1):我估计也是连接的问题,就是不知怎么处理才能连接上。 2010-03-30 12:28
应该是连接出问题了。首先看一下所用载体与目的基因的酶切位点是否合适,其次看连接酶或连接体系是否有问题。
5楼2010-03-30 08:26:32
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