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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】转化感受态细胞
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铜虫 (小有名气)
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Originally posted by 1110rainjob at 2010-03-30 15:40:59:
你这个目的基因是否转的是表达载体，如果是表达载体，有可能由于表达的目的蛋白对细胞有毒害作用等原因造成无法获得阳性克隆

请问你有过这样的实验经验吗？我最近也是转一个双元载体800左右的片段，就是转不进农杆菌中去
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11楼2010-03-30 20:15:00
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快乐由自己go

银虫 (小有名气)
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想知道LZ的载体两个黏性末端是互补的吗？如果是的话，即使片段没有连上，载体也应该自连，转化后应该出现和空载体对照相同的结果。
建议连接反应时用宽口tip操作，可以保护片段和载体的黏性末端。
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12楼2010-04-01 14:06:34
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1110rainjob

铜虫 (小有名气)
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引用回帖:
Originally posted by yet at 2010-03-30 20:15:00:

请问你有过这样的实验经验吗？我最近也是转一个双元载体800左右的片段，就是转不进农杆菌中去

我没有这方面的经验，我只是在资料中看到过类似的经验之谈。你的载体转不进去，你可以看看目的蛋白的作用，是否对农杆菌的生长有害。
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13楼2010-04-01 22:14:33
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woshisdg

新虫 (初入文坛)
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转化条件优化下试试啊！
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14楼2010-04-01 22:52:08
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