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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】转化感受态细胞
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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】转化感受态细胞

我的载体9.3k，目的片段1700bp，连接后转化感受态细胞，转了n次还是平板上直接什么都不长，郁闷死了。空载体对照倒是转进去了，还挺多的，多了1.7k就转化不进去吗？望高手帮忙
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砖石王老三！！！
1楼 2010-03-29 22:28:15
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silicare

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引用回帖:
Originally posted by Xingqinghai at 2010-03-30 10:11:19:
连接之后最好做一下验证（电泳），证明确实连接上了再转就应该没为题，大一些应该不会有这么大区别。

电泳是看不到地
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8楼2010-03-30 11:38:36
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ddzhang@

新虫 (小有名气)
jack6335(金币+1):谢谢，感受态没问题，对照能转化出来，我估计也是连接的问题，但就是不知怎么会连不上。 2010-03-30 12:25
感受态  是否完好？   肯定是在连接  这一不  上出了问题。。你再重复连一下，认真分析每一步
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3楼2010-03-29 23:03:52
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silicare

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优秀版主
jack6335(金币+1):呵呵，连了几次了，都不行，你说的是乙醇沉淀纯化一下？ 2010-03-30 12:27
大片段本来就不好连，多试几次，另外，可以考虑醋酸钠沉淀一下再转
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4楼2010-03-30 08:19:11
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gaozx123

金虫 (小有名气)
jack6335(金币+1):我估计也是连接的问题，就是不知怎么处理才能连接上。 2010-03-30 12:28
应该是连接出问题了。首先看一下所用载体与目的基因的酶切位点是否合适，其次看连接酶或连接体系是否有问题。
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5楼2010-03-30 08:26:32
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