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bluesky6636

新虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】PCR引物求助已有1人参与

我想请大家帮我看看：
我有一条序列，送到生物公司去，以其中的ORF（465bp）设计一对引物，第一次等到的引物对应的产物长度为643bp，大大超出了ORF的长度。
所以，我担心可能是设计有误，故有重新发了一次，结果对应产物长度为543bp。
这让我很搞不懂，我第三次又发了一次当初的序列，第三的结果：对应产物长度为351bp。
所以我现在不明白了，到底这三对引物能否采用，如果采用了应该用那一对引物。
谢谢了~！

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1楼 2010-03-28 23:52:59

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hui_student

银虫 (小有名气)

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★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

毫无顾虑，这样的引物根本不能用，连目的基因的长度都不能保证，你PCR出来的产物你能用么？
最好自己设计，primer5，挺简单。原核的ORF引物最好设计了，加上酶切位点和保护性碱基就OK。真核的比较复杂了，可以参考论坛里其他高手的见解。
引物设计有很多原则和要求的，既然要做这方面的研究，最好还是自己熟悉下吧！祝好运