24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 455  |  回复: 4
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

bluesky6636

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】PCR引物求助 已有1人参与

我想请大家帮我看看:
我有一条序列,送到生物公司去,以其中的ORF(465bp)设计一对引物,第一次等到的引物对应的产物长度为643bp,大大超出了ORF的长度。
所以,我担心可能是设计有误,故有重新发了一次,结果对应产物长度为543bp。
这让我很搞不懂,我第三次又发了一次当初的序列,第三的结果:对应产物长度为351bp。
所以我现在不明白了,到底这三对引物能否采用,如果采用了应该用那一对引物。
谢谢了~!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bluesky6636

新虫 (初入文坛)

那个生物公司就是上海生工,现在好像就这家给免费设计引物的。
打电话去上海生工投诉,负责接待的经理说属正常现象,相差几千bp都有可能。真是无语了~!像生工这样的公司居然这样
我自己用DNAman试过,引物要加入酶切位点,自己设计时不能把自己想要的酶切位点加入进去。加进去就显示无此对应的引物。
5楼2010-04-03 23:04:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

hui_student

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
毫无顾虑,这样的引物根本不能用,连目的基因的长度都不能保证,你PCR出来的产物你能用么?
最好自己设计,primer5,挺简单。原核的ORF引物最好设计了,加上酶切位点和保护性碱基就OK。真核的比较复杂了,可以参考论坛里其他高手的见解。
引物设计有很多原则和要求的,既然要做这方面的研究,最好还是自己熟悉下吧!祝好运
一路前行!
2楼2010-03-30 15:31:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1110rainjob

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
建议你问问生物公司设计引物的人,怎么会出现这种状况。同时,你可以将你的引物序列与你的目的基因序列比对一下,看引物的位置在哪里。
另外,PCR的模板是基因组,还是质粒?你设计依据的模板是否为cDNA。你扩增获得的片段比你预期的目的基因大,是否因为编码序列内部存在内含子序列。
3楼2010-03-30 16:00:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liby

铜虫 (初入文坛)

绝对不能使,问下他们为什么出现这种状况,换个公司
4楼2010-03-30 16:10:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085801电气专硕272求调剂 +20 电气李 2026-04-13 22/1100 2026-04-20 00:15 by Equinoxhua
[考研] 求计算机方向调剂 +3 Toffee2 2026-04-16 6/300 2026-04-19 22:37 by ll叶
[考研] 304求调剂 +8 castLight 2026-04-16 8/400 2026-04-19 17:14 by 中豫男
[考研] 求调剂推荐 +9 小聂爱学习 2026-04-14 9/450 2026-04-19 17:03 by 中豫男
[考研] 求调剂 +10 小聂爱学习 2026-04-16 12/600 2026-04-19 16:51 by 中豫男
[考研] 291求调剂 +12 关忆北. 2026-04-14 13/650 2026-04-19 16:50 by 中豫男
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +10 lzmk 2026-04-14 11/550 2026-04-19 16:42 by 中豫男
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀,最好在一个月之内的,研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 6/300 2026-04-19 13:00 by Aaron_zyn
[考研] 294求调剂 +15 淡然654321 2026-04-15 15/750 2026-04-19 08:20 by cuisz
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[考博] 申博/考博 +3 啃面包的小书虫 2026-04-17 4/200 2026-04-17 23:54 by 阳阳阳^_^
[考研] 一志愿华中农业071010,320求调剂 +17 困困困困坤坤 2026-04-14 19/950 2026-04-17 20:08 by 关一盏灯cd
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 药学求调剂 +14 喽哈加油 2026-04-14 16/800 2026-04-16 10:15 by beilsong20
[考研] 一志愿A区211,22408 321求调剂 +6 随心所欲☆ 2026-04-15 7/350 2026-04-15 21:45 by lbsjt
[考研] 297工科调剂? +14 河南农业大学-能 2026-04-13 15/750 2026-04-15 13:25 by 黑科技矿业
[教师之家] 转长聘了 +7 简单化xn 2026-04-13 7/350 2026-04-14 14:50 by xindong
[考研] 085408光电信息工程专硕355一志愿长春光机所调剂 +6 王ymaa 2026-04-13 13/650 2026-04-14 11:33 by 王ymaa
[考研] 245求调剂 +6 冰糖橘?汽水 2026-04-13 10/500 2026-04-14 10:49 by jyl0317
信息提示
请填处理意见