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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 营养安全 » 【求助】纳豆激酶活性测定
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含笑天天

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助】纳豆激酶活性测定 已有9人参与

各位高手大家好，我检测纳豆激酶活性是用纤维蛋白平办法：
    10 ml纤维蛋白原溶液（1.2 mg/ml 纤维蛋白原，50 mM 巴比妥钠，90 mM NaCl，1.7 mM CaCl2，0.7 mM MgCl2，pH 7.75)，10 ml 琼脂糖溶液（0.8%），分别在55°C水浴中温浴，向琼脂糖溶液中加入1 BP凝血酶溶液（溶在10μl巴比妥钠）。纤维蛋白原溶液和琼脂糖溶液在100 mm平皿中混合于室温放置1 h形成纤维蛋白块，打孔，点样10 μl酶液，37温浴18 h，以尿激酶（100、 80、 60、 40、 20 U/ml）为标准制作标准曲线，计算纳豆激酶的酶活。
     问题出现在尿激酶标准曲线的制作上，上次做直接点尿激酶都没有溶解圈。后来发现尿激酶通过作用于纤维蛋白溶酶原从而发挥作用，为什么我看到的文献上，在做纤维蛋白平板的时候都没提到纤维蛋白溶酶原溶液那？？不知道大家做的时候纤维蛋白溶酶原是什么时候加的？请高手赐教
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虫虫虫虫
1楼 2010-03-25 13:27:01
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

dongchao

金虫 (小有名气)

纳豆激酶的测定

含笑天天(金币+2): 2010-03-27 14:14
含笑天天(金币+2): 2010-03-27 14:15
不用纤维蛋白溶酶原,主要是因为纤维蛋白和凝血酶加入的技巧,形成的板子要是乳白色,里面是纤维蛋白浑浊,不是透明的,要多操作几次.我已经搞了4年了,希望多交流
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3楼2010-03-26 09:32:24
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普通回帖

leewolf

金虫 (小有名气)
我也准备正准备坐这个呢，我看的很多文献和你说的这个方法是差不多的，都是参考一篇1952的文献（作者：Astrup T）的，但是没下载到原文。这个问题也是我困惑的，希望高手指点。。。
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2楼2010-03-25 23:52:03
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leewolf

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dongchao at 2010-03-26 09:32:24:
不用纤维蛋白溶酶原,主要是因为纤维蛋白和凝血酶加入的技巧,形成的板子要是乳白色,里面是纤维蛋白浑浊,不是透明的,要多操作几次.我已经搞了4年了,希望多交流

能不能给总结下这些技巧，十分感谢
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4楼2010-03-26 12:33:40
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含笑天天

银虫 (正式写手)

急需技巧

引用回帖:
Originally posted by dongchao at 2010-03-26 09:32:24:
不用纤维蛋白溶酶原,主要是因为纤维蛋白和凝血酶加入的技巧,形成的板子要是乳白色,里面是纤维蛋白浑浊,不是透明的,要多操作几次.我已经搞了4年了,希望多交流

我知道这个，按照您说的意思是，尿激酶能够直接作用于纤维蛋白？我用纤维蛋白溶解法检测发现尿激酶也没有溶解纤维蛋白的活性啊，而且我直接用购买的纤维蛋白做平板，也没有溶解圈，按你说的，尿激酶应该可以直接溶解纤维蛋白？？请详细解释说明下？？非常感谢
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虫虫虫虫
5楼2010-03-27 14:18:38
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ajsun

木虫 (小有名气)
你可以调整一下尿激酶用量，我觉得是用量太小了。
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6楼2010-05-19 12:59:53
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lanlan1988

铜虫 (初入文坛)

请帮我解决问题

我目前要写有关-端粒和端粒酶的简介的论文 谁能帮我不
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7楼2010-05-20 16:46:46
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751888275

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我也要做呢 交流一下下吧！
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8楼2012-02-24 13:13:16
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zhenxi15

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
楼主，我周围有人在做这个活性测定，但标准品用的是蚓激酶，不是尿激酶
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9楼2012-02-29 10:58:10
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zhenxi15

银虫 (小有名气)
★ ★
树树8013: 金币+2, 08年的虫友，欢迎常来交流。 2012-04-27 21:24:11
尿激酶好像不能直接溶解纤维蛋白
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10楼2012-02-29 10:59:35
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