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ljj200511

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助】淀粉酶的热变性公式不懂 已有3人参与

2.5         α-淀粉酶的热变性
不同浓度的助溶剂对α-淀粉酶的热变性的影响通过Cary Varian 100-bio UV-Visible 分光光度计(Muglgrave Victoria, 澳大利亚产)在287nm处比色皿厚度1cm,扫描速率1℃/min,温度范围在30至90℃测试。在整个实验过程中,蛋白质溶液浓度是8.6×10-6M,含0.02M柠檬酸缓冲溶液,pH 5.9和2mM的CaCl2溶液。α-淀粉酶的(Tm)app通过计算原始和变性后酶的状态得到。酶的片段展开(Fu)在不同温度下获得,(Tm)app通过下式计算得到:
                 Fu=(At-An)/(Ad-An)                             (3)
式中,An和Ad分别是蛋白质原始和变性后的吸光度,At是在T温度下蛋白质的吸光度。在(Tm)app的标准焓变(∆HO)和标准熵变(∆SO)通过蛋白质变性平衡系数计算得来(Tanford 1968; Pace and Scoltz 1997; Atkin and Paula 2006)。
           K=Fu/(1-Fu)                                (4)
             ∆GO=-RTlnK                               (5)
在(Tm)app下蛋白质的原始和变性的状态处于平衡,因此K=1,∆GO=0。计算式如下:
       ∆SO=∆HO/T                                    (6)
        ∆HO=-Rd(lnK)/d(1/T)                                     (7)
式中R是通用气体常数,T是绝对温度。


我想问下,我不理解这篇文献里面说的Ad是什么意思,蛋白质酶都变性了,还怎么测试吸光度啊!谢谢各位啦!
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zysytu

木虫 (正式写手)


hawkyin(金币+1):谢谢回帖 2010-04-04 11:05
Ad是吸光度,280nm的吸光度,280nm是含有苯环的氨基酸的特征吸收波长,如果蛋白质变性了,那么蛋白质的3、4级结构必定变化,原先可能埋藏咋分子内部的芳香族氨基酸在热的作用下外翻,外露,280nm的吸光度就会增强。再参照未变性的An,就可计算出变形后 有多少新的芳香族氨基酸外露,以此来表征变性程度。
2楼2010-03-23 10:00:51
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zysytu

木虫 (正式写手)

怎么不见楼主了呢?
3楼2010-04-04 10:04:22
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ljj200511

新虫 (小有名气)

我还是不太懂啊!
4楼2010-04-06 14:32:48
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ljj200511

新虫 (小有名气)

我是想问各个符号代表什么意思啊,谢谢啦!
5楼2010-04-06 15:19:50
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)


二楼解释的不错啊!!
6楼2010-04-06 19:25:28
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zysytu

木虫 (正式写手)


lwb1987521(金币+1):不错,很细心,感谢您的交流 2010-04-07 09:14
引用回帖:
Originally posted by ljj200511 at 2010-04-06 15:19:50:
我是想问各个符号代表什么意思啊,谢谢啦!

上面得公式也就是一个 相对变性率,变性以后 原来在蛋白质分子内的含有苯环的氨基酸从内部迁移到分子表面,吸光度就会增加。迁移的越多,变性越剧烈,吸光度越高。所以就有变性百分率了

变性了也有吸光度啊,怎么就没有了呢?

[ Last edited by zysytu on 2010-4-7 at 09:15 ]
7楼2010-04-07 09:12:45
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ljj200511

新虫 (小有名气)

不好意思啊,我不是学这个专业的,现在做纺织生物酶的课题,不懂得好多哦!现在主要是研究生物酶(淀粉酶和果胶酶)的热稳定性的,关于热稳定性这块,你们知道的多吗?有些数据不好处理啊!谢谢各位啦啊!
8楼2010-04-07 19:20:21
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