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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 【求助】淀粉酶的热变性公式不懂
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【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 ljj200511 的 10 个金币

ljj200511

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助】淀粉酶的热变性公式不懂 已有3人参与

2.5         α-淀粉酶的热变性
不同浓度的助溶剂对α-淀粉酶的热变性的影响通过Cary Varian 100-bio UV-Visible 分光光度计（Muglgrave Victoria, 澳大利亚产）在287nm处比色皿厚度1cm，扫描速率1℃/min，温度范围在30至90℃测试。在整个实验过程中，蛋白质溶液浓度是8.6×10-6M，含0.02M柠檬酸缓冲溶液，pH 5.9和2mM的CaCl2溶液。α-淀粉酶的(Tm)app通过计算原始和变性后酶的状态得到。酶的片段展开（Fu）在不同温度下获得，(Tm)app通过下式计算得到：
                 Fu=(At-An)/(Ad-An)                             （3）
式中，An和Ad分别是蛋白质原始和变性后的吸光度，At是在T温度下蛋白质的吸光度。在(Tm)app的标准焓变（∆HO）和标准熵变（∆SO）通过蛋白质变性平衡系数计算得来（Tanford 1968; Pace and Scoltz 1997; Atkin and Paula 2006）。
           K=Fu/（1-Fu）                                （4）
             ∆GO=-RTlnK                               （5）
在(Tm)app下蛋白质的原始和变性的状态处于平衡，因此K=1，∆GO=0。计算式如下：
       ∆SO=∆HO/T                                    （6）
        ∆HO=-Rd（lnK）/d（1/T)                                     （7）
式中R是通用气体常数，T是绝对温度。


我想问下，我不理解这篇文献里面说的Ad是什么意思，蛋白质酶都变性了，还怎么测试吸光度啊！谢谢各位啦！
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1楼 2010-03-22 19:53:15
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zysytu

木虫 (正式写手)
★
hawkyin(金币+1):谢谢回帖 2010-04-04 11:05
Ad是吸光度，280nm的吸光度，280nm是含有苯环的氨基酸的特征吸收波长，如果蛋白质变性了，那么蛋白质的3、4级结构必定变化，原先可能埋藏咋分子内部的芳香族氨基酸在热的作用下外翻，外露，280nm的吸光度就会增强。再参照未变性的An，就可计算出变形后 有多少新的芳香族氨基酸外露，以此来表征变性程度。
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2楼2010-03-23 10:00:51
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zysytu

木虫 (正式写手)
怎么不见楼主了呢？
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3楼2010-04-04 10:04:22
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ljj200511

新虫 (小有名气)
我还是不太懂啊！
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4楼2010-04-06 14:32:48
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ljj200511

新虫 (小有名气)
我是想问各个符号代表什么意思啊，谢谢啦！
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5楼2010-04-06 15:19:50
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
二楼解释的不错啊！！
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6楼2010-04-06 19:25:28
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zysytu

木虫 (正式写手)
★
lwb1987521(金币+1):不错，很细心，感谢您的交流 2010-04-07 09:14
引用回帖:
Originally posted by ljj200511 at 2010-04-06 15:19:50:
我是想问各个符号代表什么意思啊，谢谢啦！

上面得公式也就是一个 相对变性率，变性以后 原来在蛋白质分子内的含有苯环的氨基酸从内部迁移到分子表面，吸光度就会增加。迁移的越多，变性越剧烈，吸光度越高。所以就有变性百分率了

变性了也有吸光度啊，怎么就没有了呢？

[ Last edited by zysytu on 2010-4-7 at 09:15 ]
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7楼2010-04-07 09:12:45
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ljj200511

新虫 (小有名气)
不好意思啊，我不是学这个专业的，现在做纺织生物酶的课题，不懂得好多哦！现在主要是研究生物酶（淀粉酶和果胶酶）的热稳定性的，关于热稳定性这块，你们知道的多吗？有些数据不好处理啊！谢谢各位啦啊！
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8楼2010-04-07 19:20:21
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