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【求助】淀粉酶的热变性公式不懂 已有3人参与
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2.5 α-淀粉酶的热变性 不同浓度的助溶剂对α-淀粉酶的热变性的影响通过Cary Varian 100-bio UV-Visible 分光光度计（Muglgrave Victoria, 澳大利亚产）在287nm处比色皿厚度1cm，扫描速率1℃/min，温度范围在30至90℃测试。在整个实验过程中，蛋白质溶液浓度是8.6×10-6M，含0.02M柠檬酸缓冲溶液，pH 5.9和2mM的CaCl2溶液。α-淀粉酶的(Tm)app通过计算原始和变性后酶的状态得到。酶的片段展开（Fu）在不同温度下获得，(Tm)app通过下式计算得到： Fu=(At-An)/(Ad-An) （3） 式中，An和Ad分别是蛋白质原始和变性后的吸光度，At是在T温度下蛋白质的吸光度。在(Tm)app的标准焓变（∆HO）和标准熵变（∆SO）通过蛋白质变性平衡系数计算得来（Tanford 1968; Pace and Scoltz 1997; Atkin and Paula 2006）。 K=Fu/（1-Fu） （4） ∆GO=-RTlnK （5） 在(Tm)app下蛋白质的原始和变性的状态处于平衡，因此K=1，∆GO=0。计算式如下： ∆SO=∆HO/T （6） ∆HO=-Rd（lnK）/d（1/T) （7） 式中R是通用气体常数，T是绝对温度。 我想问下，我不理解这篇文献里面说的Ad是什么意思，蛋白质酶都变性了，还怎么测试吸光度啊！谢谢各位啦！ |
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