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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】重组蛋白纯化
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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gogo926

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】重组蛋白纯化

Sample Text

求助各位虫友：

第一次做重组纯化，发现：
1. 蛋白挂不上Ni柱，在透过里；
2. 0-100%线性洗脱50 min（PH=7.4, PBS，500mM咪唑)，45%左右出蛋白峰，但
   咪唑达到500mM时蛋白峰都不下降是怎么回事？

蛋白等电点为10.9，分子量179 kD，用pET28 载体、宿主菌BL21(DE3)表达，C端有his标签

多谢！
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1楼 2010-03-22 09:31:08
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
缓冲液里面补点NaCl吧，一般0.5M。
另外，咪唑的紫外吸收还挺强的。
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生物资源交流QQ群：1044518333
4楼2010-03-22 20:23:17
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gogo926

银虫 (小有名气)
呜呜，怎么没有大侠回呢
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2楼2010-03-22 15:59:43
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
咪唑本身有紫外吸收
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3楼2010-03-22 20:06:05
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gogo926

银虫 (小有名气)
洗脱液里有0.5M的氯化钠的
而且这个酶以前做的时候紫外峰会下去的，很纠结啊

[ Last edited by gogo926 on 2010-3-23 at 08:11 ]
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5楼2010-03-23 08:05:46
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