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gogo926

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】重组蛋白纯化

Sample Text

求助各位虫友:

第一次做重组纯化,发现:
1. 蛋白挂不上Ni柱,在透过里;
2. 0-100%线性洗脱50 min(PH=7.4, PBS,500mM咪唑),45%左右出蛋白峰,但
   咪唑达到500mM时蛋白峰都不下降是怎么回事?

蛋白等电点为10.9,分子量179 kD,用pET28 载体、宿主菌BL21(DE3)表达,C端有his标签

多谢!
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gogo926

银虫 (小有名气)

呜呜,怎么没有大侠回呢
2楼2010-03-22 15:59:43
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)

咪唑本身有紫外吸收
3楼2010-03-22 20:06:05
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
缓冲液里面补点NaCl吧,一般0.5M。
另外,咪唑的紫外吸收还挺强的。
生物资源交流QQ群:1044518333
4楼2010-03-22 20:23:17
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gogo926

银虫 (小有名气)

洗脱液里有0.5M的氯化钠的
而且这个酶以前做的时候紫外峰会下去的,很纠结啊

[ Last edited by gogo926 on 2010-3-23 at 08:11 ]
5楼2010-03-23 08:05:46
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