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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒电泳的问题请教
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cz2004cz

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】质粒电泳的问题请教

我在基因电泳的时候碰到一个问题，希望各位大虾能指点一二呀！
我的基因用荧光染色法测浓度的时候可以检测出明显的超螺旋结构（荧光染料应该是只染超螺旋结构的吧？如果不是超螺旋结构就染不了色，原理应该是没错吧？），但是电泳的时候却跑不开条带。而且条带跑的比loding buffer还快。请问这是为什么呀？


[ Last edited by cz2004cz on 2010-3-18 at 09:50 ]
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修和无人见，存心有天知！
1楼 2010-03-18 09:38:15
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silicare

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★ ★
cz2004cz(金币+1):谢谢参与
cz2004cz(金币+2): 2010-03-18 10:53
1949stone(金币+1): 2010-03-18 13:27
比buffer快是什么意思，比溴酚蓝快？

如果那样的话就是RNA污染
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2楼2010-03-18 10:14:38
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cz2004cz

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-03-18 10:14:38:
比buffer快是什么意思，比溴酚蓝快？

如果那样的话就是RNA污染

是的，就是比溴酚兰快。
RNA污染？RNA也可以检测出荧光嘛？但是这个基因未经处理的时候，没有这条带呀？基因处理的过程中没有引入RNA的可能。还望赐教!
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修和无人见，存心有天知！
3楼2010-03-18 10:53:15
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silicare

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基因怎么还有超螺旋啊，还以为是质粒呢
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4楼2010-03-18 11:13:00
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silicare

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你是不是 说 是 双螺旋啊

你的意思是sybr green之类的双链荧光吧，
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5楼2010-03-18 11:13:59
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cz2004cz

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-03-18 11:13:59:
你是不是 说 是 双螺旋啊

你的意思是sybr green之类的双链荧光吧，

是的，就是质粒。用hochest33258染色的。关键是没处理之前跑的电泳都是正常的，荧光和电泳对的上；但处理后就只能测出荧光，电泳就对不上了.
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6楼2010-03-18 11:29:12
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silicare

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还是没看明白，

荧光怎么跟超螺旋扯上关系了，什么叫 跑不开啊
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7楼2010-03-18 14:20:21
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ln0401

新虫 (初入文坛)
★
cz2004cz(金币+1):谢谢参与
cz2004cz(金币+2): 2010-03-18 16:58
看的不是很明白，质粒电泳检测，一般超螺旋，开环，线性都可以检测出来的，若果有RNA污染，也可以检测出来，通常RNA的迁移速率较快，在溴酚蓝前。
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8楼2010-03-18 14:39:46
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cz2004cz

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-03-18 14:20:21:
还是没看明白，

荧光怎么跟超螺旋扯上关系了，什么叫 跑不开啊

荧光染色是染料和双螺旋结构的沟槽结合，因此只有双螺旋结构能够检测出荧光。
我说的意思是电泳时只在溴酚蓝前面有一条模糊的带，并没有dna的带。
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9楼2010-03-18 16:54:05
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cz2004cz

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by ln0401 at 2010-03-18 14:39:46:
看的不是很明白，质粒电泳检测，一般超螺旋，开环，线性都可以检测出来的，若果有RNA污染，也可以检测出来，通常RNA的迁移速率较快，在溴酚蓝前。

谢谢！你的意思是这条带应该是rRNA，我明白你的意思。但是奇怪的是我的dna在没经过任何处理的时候电泳时没有这条带，而是很好的两条标准的dna带，但是处理后就只剩下溴酚蓝前面的带了。而处理过程中是没有接触过RNA的。所以还有一种可能是dna降解了，但是专门针对双螺旋结构的荧光检测又可以检测出双螺旋结构。这是我困惑的地方。
还有，多谢你的留言，也解答我的一些疑惑。
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修和无人见，存心有天知！
10楼2010-03-18 16:57:59
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