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准博士金虫 (正式写手)
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[交流]
【求助/交流】到底问题出在哪?
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最近开始做一个关键酶的基因,本来16s rDNA鉴定出来与一个菌的同源性有98% ,并且我们的目的产物是同一个家族的高分子多糖。我就用的那个已经菌的已经酶的基因设计的引物,想直接钓基因。可是,重复了几次实验,特异性都不强,条带很多,目的条带很淡,甚至没有,也调整了模板的浓度,引物的浓度,还有退火温度,还是不行啊,急啊,等着毕业。 想请教大家: (1)同源性98%的菌可不可以这样设计引物,我之前也用过简并引物的方法,但是没有扩到过想要的东西,那个实验做了半年,没有出来想要的片段 (2)这个学期刚刚开始,菌种鉴定,然后设计基因,怎么还是扩不出东西来? (3)一个很简单的最基本的分子实验,怎么到我这就这么难啊? 难道是我的基因组的问题?还是其它的原因,我真是无语了。请高人指点 |
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yujiaping1
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