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准博士金虫 (正式写手)
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[交流]
【求助/交流】到底问题出在哪？
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最近开始做一个关键酶的基因，本来16s rDNA鉴定出来与一个菌的同源性有98％ ，并且我们的目的产物是同一个家族的高分子多糖。我就用的那个已经菌的已经酶的基因设计的引物，想直接钓基因。可是，重复了几次实验，特异性都不强，条带很多，目的条带很淡，甚至没有，也调整了模板的浓度，引物的浓度，还有退火温度，还是不行啊，急啊，等着毕业。 想请教大家： （1)同源性98％的菌可不可以这样设计引物，我之前也用过简并引物的方法，但是没有扩到过想要的东西，那个实验做了半年，没有出来想要的片段 （2)这个学期刚刚开始，菌种鉴定，然后设计基因，怎么还是扩不出东西来？ （3)一个很简单的最基本的分子实验，怎么到我这就这么难啊？ 难道是我的基因组的问题？还是其它的原因，我真是无语了。请高人指点 |
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