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815kathy

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒老提不出来

最近在提质粒,死活也提不出来,每次电泳完紫外下照除了RNA什么也没有,要是加入溶液二剧烈了的话也该有基因组啊,基因组也没有。现在主要有以下几个问题:
1.加入溶液二有时候不变澄清,是怎么回事,与细菌的革兰氏阴阳性有无关系呢?
2.溶液三加入后,出现了沉淀,吸取一点点上清,测PH为酸性,并不是传说中的中性啊,这是怎么回事呢?
3.加入溶液三后大概要冰浴多长时间呢?有说5min的,有说10min的,还有说15min的。。。
希望各位大虾指点迷津。。
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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)


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我们做的时候冰浴5min钟,你确保试剂比例合适?如果是就不应该呀!细菌的革兰氏阴阳性可能有关,因为阳性细胞壁太厚,可能破壁不充分吧。
倚楼听风雨,淡看江湖路!
2楼2010-03-11 23:11:54
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steven689

木虫 (著名写手)

阳性的话 加溶菌酶
3楼2010-03-12 08:40:22
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815kathy

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 冬虫夏草1 at 2010-03-11 23:11:54:
我们做的时候冰浴5min钟,你确保试剂比例合适?如果是就不应该呀!细菌的革兰氏阴阳性可能有关,因为阳性细胞壁太厚,可能破壁不充分吧。

恩,试剂比例是100,200,150啊,请问试剂三你是怎么配的啊,按照醋酸钠60ml,冰乙酸11.5ml,水28.5ml,配出来的溶液PH值是5.5左右,可是有的地方又说是4.8,要是再往里面加冰乙酸调的话不就使得溶液体积增大了吗
4楼2010-03-12 08:43:12
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)

增加菌量试试
5楼2010-03-12 09:35:21
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j2

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1 溶液2不变澄清可能是细菌菌量多了,不能完全破壁;也可能是革兰氏阳性菌,没加溶菌酶,压根就没破壁
2 没配过
3 也可以不放置的
如果没出来,是不是你的菌本身质粒就低,可考虑最后浓缩后电泳
修炼ing,当虫仙……
6楼2010-03-12 16:25:31
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livacin

铁虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这个情况我也遇到过 同样的试剂 但是就是被处理的菌液不同 有的就可以被2液消化 有的就不行 始终保持浑浊 无粘性 我觉得跟菌液有关系
7楼2010-03-12 22:15:58
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lansha8331

无虫 (小有名气)


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也没准是盒子的问题呢,换一家试试,我用的威格拉斯的去内毒素大提,可以参考一下
8楼2010-03-18 10:32:19
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