应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】经验求助
81/1返回列表
查看: 459  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

森林7631

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】经验求助

请教各位一个问题，我有一株真菌，想扩一个酶基因，但在网上还未有真菌中这个酶基因的报道，只有细菌和放线菌中有这个酶基因的报道，我现在应该依据什么去设计引物，怎么去做，请给位指教，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
Time lost can not be recalled.
1楼 2010-03-06 15:42:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanfeier
1949stone:解决问题的沙发 才是好沙发 2010-03-06 20:45
顶一下。。。
2楼2010-03-06 16:00:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 2010-03-07 16:16
根据细菌和放线菌的基因设计同源引物（可以根据同源性大小，考虑是否需要设计简并引物，能不用简并引物，最好不用），得到扩增片段后，克隆测序，然后设计两端的RACE引物，获得两端序列，拼接得到全长基因。
如果基因足够短，1000bp左右或者更小，可以直接设计RACE引物，克隆测序拼接。

你这里存在的问题是：细菌和放线菌都是原核生物，和真菌的差异可能会很大，究竟有多少同源性，很难讲，建议你再查查相关真核生物该基因的研究进展
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-03-06 21:56:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

85715623

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-03-07 16:16
据说可以先得到蛋白，再反推核酸，克隆。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-03-07 10:28:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
一般的按照2楼的做法，三楼的做法很难做，不是那么好推，因为氨基酸有间并型，希望对你有所帮助
赞一下 回复此楼
将有能量帮助他人作为自己的人生追求！
5楼2010-03-07 16:12:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
诱导酶的表达，提取菌体总RNA逆转录，最后得到基因
赞一下(1人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2010-03-07 16:53:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果要纯化蛋白质，那么按照蛋白质测序的要求，要达到一定的量和纯度就必须多次纯化，包括各种纯化路线设计、试剂选择、条件摸索，极其费时。退一万步，密码子的兼并性也是个问题，可以说如果仅这样是绝对绝对不能获得菌体里的基因的，总有偏差。这是最差的路线。

设计引物，面临同源性底下，无功而返的危险，不过也有极少可能性一下子成功。

提取RNA还是值得一试的，有可能一下子获得全长，这个可能性是三种路线中最大的。个人见解，而且推荐此法。
赞一下(1人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2010-03-07 16:59:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

森林7631

铜虫 (小有名气)
谢谢大家的建议，我年前做的就是2楼朋友说的那种方法，根据细菌和真菌中报道的酶基因设计普通引物和简并引物，但扩增结果不理想，上下游引物可以在测序结果中找到，但是翻译成蛋白质后中间有好多终止（stop）。6楼朋友的三种分析很详细，很感谢你！
赞一下 回复此楼
Time lost can not be recalled.
8楼2010-03-08 10:15:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 森林7631 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854调剂 +5 长弓傲 2026-04-11 5/250 2026-04-11 16:26 by zhouyuwinner
[考研] 327求调剂 +4 拾光任染 2026-04-06 4/200 2026-04-11 12:01 by Delta2012
[考研] 生物学调剂 可调剂到生物与医药 +8 李政莹 2026-04-06 9/450 2026-04-11 10:36 by wwj2530616
[考研] 电子信息279求调剂，有书读就行 +5 wwwooden 2026-04-08 8/400 2026-04-11 09:30 by zhq0425
[考研] 本科西工大 0856 324求调剂 +10 wysyjs25 2026-04-09 11/550 2026-04-10 08:37 by 5268321
[考研] 材料专硕调剂 +16 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-07 17/850 2026-04-09 21:16 by wutongshun
[考研] 材料化工总分334求调剂 +16 Riot2025 2026-04-08 17/850 2026-04-09 20:19 by maddjdld
[考研] 一志愿华工085600 331分 +6 天下ww 2026-04-09 6/300 2026-04-09 18:59 by l_paradox
[考研] 348求调剂 +3 candyyyi 2026-04-09 3/150 2026-04-09 17:20 by 段伟艳
[考研] 一志愿电子科技大学085600材料与化工 329分求调剂 +14 Naiko 2026-04-04 14/700 2026-04-09 16:56 by luoyongfeng
[考研] 322求调剂，08工科 +3 今天是个小号 2026-04-08 3/150 2026-04-09 15:53 by wp06
[考研] 327求调剂 +12 Xxjc1107. 2026-04-06 12/600 2026-04-08 16:46 by luoyongfeng
[考研] 277求调剂 +4 考研调剂lxh 2026-04-06 6/300 2026-04-08 10:40 by 逆水乘风
[考研] 288环境专硕,求调材料方向 +35 lllllos 2026-04-04 39/1950 2026-04-07 23:24 by 一只好果子?
[考研] 305求调剂 +4 77Qi 2026-04-06 4/200 2026-04-07 20:06 by shanqishi
[考研] 生物工程求调剂 +13 喜欢还是不甘心 2026-04-05 13/650 2026-04-07 16:55 by Ecowxq666！
[考研] 362求调剂一志愿中国石油大学 +4 我要考大 2026-04-06 6/300 2026-04-06 14:11 by 无际的草原
[考研] 346分的生物与医药08600求调剂 +6 常雨阳上岸 2026-04-05 7/350 2026-04-06 12:36 by lys0704
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-04-04 5/250 2026-04-05 14:06 by imissbao
[考研] 341求调剂 +3 学无止境，冲 2026-04-05 3/150 2026-04-05 09:40 by lbsjt
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭