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森林7631

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】经验求助

请教各位一个问题,我有一株真菌,想扩一个酶基因,但在网上还未有真菌中这个酶基因的报道,只有细菌和放线菌中有这个酶基因的报道,我现在应该依据什么去设计引物,怎么去做,请给位指教,谢谢!
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
诱导酶的表达,提取菌体总RNA逆转录,最后得到基因
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2010-03-07 16:53:27
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果要纯化蛋白质,那么按照蛋白质测序的要求,要达到一定的量和纯度就必须多次纯化,包括各种纯化路线设计、试剂选择、条件摸索,极其费时。退一万步,密码子的兼并性也是个问题,可以说如果仅这样是绝对绝对不能获得菌体里的基因的,总有偏差。这是最差的路线。

设计引物,面临同源性底下,无功而返的危险,不过也有极少可能性一下子成功。

提取RNA还是值得一试的,有可能一下子获得全长,这个可能性是三种路线中最大的。个人见解,而且推荐此法。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2010-03-07 16:59:38
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