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森林7631

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】经验求助

请教各位一个问题，我有一株真菌，想扩一个酶基因，但在网上还未有真菌中这个酶基因的报道，只有细菌和放线菌中有这个酶基因的报道，我现在应该依据什么去设计引物，怎么去做，请给位指教，谢谢！
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Time lost can not be recalled.
1楼 2010-03-06 15:42:02
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
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诱导酶的表达，提取菌体总RNA逆转录，最后得到基因
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6楼2010-03-07 16:53:27
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
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如果要纯化蛋白质，那么按照蛋白质测序的要求，要达到一定的量和纯度就必须多次纯化，包括各种纯化路线设计、试剂选择、条件摸索，极其费时。退一万步，密码子的兼并性也是个问题，可以说如果仅这样是绝对绝对不能获得菌体里的基因的，总有偏差。这是最差的路线。

设计引物，面临同源性底下，无功而返的危险，不过也有极少可能性一下子成功。

提取RNA还是值得一试的，有可能一下子获得全长，这个可能性是三种路线中最大的。个人见解，而且推荐此法。
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7楼2010-03-07 16:59:38
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