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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如何做菌落PCR?
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greatsaint

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】如何做菌落PCR?

最近想做菌落PCR，但是不知道具体如何操作，特别是需要注意什么问题，请大家帮忙。谢谢！
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1楼 2010-01-27 10:58:23
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
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我的步骤：
1：挑取单克隆入小离心管，进行裂解（15Min);
2：往离心管加入PCR的物质（buffer 酶，DMSO，引物等），然后分装（看你做多少体系了）；
3：待模板裂解完毕，加入模板，然后进行PCR！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
8楼2010-01-27 13:49:23
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IDname

捐助贵宾 (正式写手)

钢虫
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
就是用菌落代替模板，把单菌落挑出来放进PCR体系，开始P
挑单菌落可以用PCR clean的tips，注意尽量别挑培养基
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2楼2010-01-27 11:43:46
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挥汗如雨

至尊木虫 (职业作家)
★
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我们操作方法如下：
1. 在1.5 ml的离心管中加入0.5 ml 液体培养基；
2. 用牙签或小枪头挑取平板上的菌落单斑；
3: 带有菌的牙签放入离心管，然后取出，盖好盖子过夜摇菌培养；
4: 20微升PCR体系，加入摇好的菌液1微升,35个循环；
5: 剩余菌液保存菌种。
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人生有三样东西不可挽回：时间，机遇，还有说出去的话。
3楼2010-01-27 12:40:34
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hongrunge

铁杆木虫 (小有名气)
★
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楼上的感觉和菌液PCR没什么区别。
直接用灭过菌的牙签挑取少量菌体至tube中，加入配好的体系即可。
挑取的菌体不要太多，tube管底可见淡淡的菌体痕迹即可；挑入菌体量过多反而容易干扰试验，造成非特异性扩增等不良后果
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4楼2010-01-27 12:56:31
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