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greatsaint

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】如何做菌落PCR?

最近想做菌落PCR,但是不知道具体如何操作,特别是需要注意什么问题,请大家帮忙。谢谢!
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挥汗如雨

至尊木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我们操作方法如下:
1. 在1.5 ml的离心管中加入0.5 ml 液体培养基;
2. 用牙签或小枪头挑取平板上的菌落单斑;
3: 带有菌的牙签放入离心管,然后取出,盖好盖子过夜摇菌培养;
4: 20微升PCR体系,加入摇好的菌液1微升,35个循环;
5: 剩余菌液保存菌种。
人生有三样东西不可挽回:时间,机遇,还有说出去的话。
3楼2010-01-27 12:40:34
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IDname

捐助贵宾 (正式写手)

钢虫


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
就是用菌落代替模板,把单菌落挑出来放进PCR体系,开始P
挑单菌落可以用PCR clean的tips,注意尽量别挑培养基
2楼2010-01-27 11:43:46
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hongrunge

铁杆木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
楼上的感觉和菌液PCR没什么区别。
直接用灭过菌的牙签挑取少量菌体至tube中,加入配好的体系即可。
挑取的菌体不要太多,tube管底可见淡淡的菌体痕迹即可;挑入菌体量过多反而容易干扰试验,造成非特异性扩增等不良后果
4楼2010-01-27 12:56:31
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 挥汗如雨 at 2010-01-27 12:40:34:
我们操作方法如下:
1. 在1.5 ml的离心管中加入0.5 ml 液体培养基;
2. 用牙签或小枪头挑取平板上的菌落单斑;
3: 带有菌的牙签放入离心管,然后取出,盖好盖子过夜摇菌培养;
4: 20微升PCR体系,加入摇好的菌 ...

这样做还是略显麻烦
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2010-01-27 13:07:08
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