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greatsaint银虫 (小有名气)
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【求助/交流】如何做菌落PCR?
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| 最近想做菌落PCR，但是不知道具体如何操作，特别是需要注意什么问题，请大家帮忙。谢谢！ |
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我通常会这样做： 第一种方法： 在PCR管子里面先加上10ul的水，然后编上号1，2，3，4，5，6，7.。。。。。。同时在一块新的LB固体平板上，画上格子也编上号1，2，3，4，5，6，7.。。。。。。。。，然后开始挑菌，第一个，先在平板上的标1号处，划上二到三下，然后再在标1号的PCR管吹洗几下，以此类推，然后平板放培养箱培养，稀释有菌体的水做模板，正常做PCR，跑完后电泳，确定结果，在平板上把阳性克隆用笔画出 第二种方法： 上面的稀释有菌体的水取一部分做PCR，剩余的部分4度或者冰上保存，等PCR结束电泳后，直接挑阳性克隆的水放到液体LB培养基培养就可以了，这步就不用画板子了，但这种方法有缺陷，就是没有划到新板子上以后菌取用起来方便 |
7楼2010-01-27 13:16:21
yujiaping1
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菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因组DNA，不必酶切鉴定，而是直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，省时少力。建议使用载体上的通用引物。通常利用此方法进行重组体的筛选或者DNA测序分析。最后的PCR产物大小是载体通用引物之间的插入片断大小。 详细方法给你个网站，仔细看看吧： 菌落PCR（Colony PCR）方法 http://www.bbioo.com/bio101/2007/19750.htm |
10楼2010-01-27 14:19:21
