24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 898  |  回复: 3
当前主题已经存档。

小白3521

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白纯化后镍柱的清洗

刚纯化了蛋白,想要再次纯化同一个蛋白
需要洗柱子吗?
应该不用再生,只用清洗就行了,我看论坛上有人说用结合缓冲液(20-30mmol咪唑)洗几次就行了,有没有做过的,有具体步骤吗
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
原来做实验的时候实验结束后使用1M咪唑清洗柱子,然后使用0.5M EDTA洗掉镍离子。灌入20%乙醇4度下保存。
现在不在用1M咪唑洗了,直接用EDTA洗镍,然后8M尿素洗胶,然后洗掉尿素灌入20%乙醇。
GE说明书上的一种再生使用0.2M EDTA和0.5M的NaCl洗,然后使用0.5M的NaCl洗。

使用尿素洗的时候能明显看到胶有原来的浑浊态变的清亮。

[ Last edited by 月月大可 on 2010-1-26 at 13:14 ]
2楼2010-01-26 13:12:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qrf0704

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
只用过一次,所以你不用再生,重新挂镍,只需要在上一次使用时,用含500 mM咪唑洗脱下来蛋白后,用去离子水彻底清洗柱子,然后用20%乙醇洗柱子,就可以了,再次使用时,只需要洗掉乙醇,就可以用你的缓冲液进行平衡了,进样。
3楼2010-01-27 13:17:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白3521

金虫 (小有名气)

好的 谢谢啦
4楼2010-01-27 13:54:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小白3521 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿厦大0856,306求调剂 +15 Bblinging 2026-04-11 15/750 2026-04-11 22:53 by 314126402
[硕博家园] 有没有学校材料专业收跨调(一志愿085410) +6 momo(上岸版) 2026-04-06 9/450 2026-04-11 22:38 by wj165256
[考研] 本人女孩 +7 吼吼, 2026-04-10 9/450 2026-04-11 14:45 by ACS Nano——
[考研] 269电子信息求调剂,可转专业 +11 独酌wl 2026-04-06 11/550 2026-04-11 11:12 by 逆水乘风
[考研] 农学0904 312求调剂 +6 Say Never 2026-04-10 6/300 2026-04-11 10:33 by wwj2530616
[考研] 297求调剂 +9 Kwgyz 2026-04-09 9/450 2026-04-11 10:09 by zhq0425
[考研] 080100力学316求调剂 +8 L_Hairui 2026-04-07 8/400 2026-04-11 10:00 by zhq0425
[考研] 求调剂288 +6 ioodiiij 2026-04-10 8/400 2026-04-10 21:07 by zhouxiaoyu
[考研] 一志愿华东师范生物学326分,求调剂 +8 刘墨墨 2026-04-09 8/400 2026-04-10 12:00 by pengliang8036
[考研] 机械还有还有名额吗?太难了 +6 笑笑袁 2026-04-10 6/300 2026-04-10 11:54 by 高维春
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-04-05 11/550 2026-04-10 09:32 by 钟洲2011
[考博] 博士自荐 +7 可可小胖 2026-04-08 7/350 2026-04-10 08:28 by kimhero
[考研] 08600生物与医药-327 +10 18755400796 2026-04-05 10/500 2026-04-10 08:14 by kangsm
[考研] 085404,285分求调剂 +12 薇薇考研 2026-04-07 14/700 2026-04-09 23:10 by parmtree
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +3 LZH(等待调剂中 2026-04-09 3/150 2026-04-09 21:29 by wutongshun
[考研] 材料工程调剂 +12 小刘同学吖吖 2026-04-06 13/650 2026-04-09 17:07 by luoyongfeng
[考研] 307分材料专业求调剂 +12 Hll胡 2026-04-05 12/600 2026-04-08 16:33 by luoyongfeng
[考研] 316求调剂 +7 yyx想调剂 2026-04-05 7/350 2026-04-07 14:31 by shdgaomin
[考研] 一志愿河北工业大学材料工程,初试344求专硕调剂 +6 15933906766 2026-04-05 6/300 2026-04-06 13:21 by 无际的草原
[考研] 085500机械专硕初试288求调剂 +3 GZJguo666- 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:06 by jkddd
信息提示
请填处理意见