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小白3521

金虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】蛋白纯化后镍柱的清洗

刚纯化了蛋白，想要再次纯化同一个蛋白
需要洗柱子吗？
应该不用再生，只用清洗就行了，我看论坛上有人说用结合缓冲液（20-30mmol咪唑）洗几次就行了，有没有做过的，有具体步骤吗

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1楼 2010-01-26 11:19:50

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月月大可

木虫 (著名写手)

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原来做实验的时候实验结束后使用1M咪唑清洗柱子，然后使用0.5M EDTA洗掉镍离子。灌入20%乙醇4度下保存。
现在不在用1M咪唑洗了，直接用EDTA洗镍，然后8M尿素洗胶，然后洗掉尿素灌入20%乙醇。
GE说明书上的一种再生使用0.2M EDTA和0.5M的NaCl洗，然后使用0.5M的NaCl洗。

使用尿素洗的时候能明显看到胶有原来的浑浊态变的清亮。

[ Last edited by 月月大可 on 2010-1-26 at 13:14 ]