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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白纯化后镍柱的清洗
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小白3521

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白纯化后镍柱的清洗

刚纯化了蛋白，想要再次纯化同一个蛋白
需要洗柱子吗？
应该不用再生，只用清洗就行了，我看论坛上有人说用结合缓冲液（20-30mmol咪唑）洗几次就行了，有没有做过的，有具体步骤吗
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1楼 2010-01-26 11:19:50
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月月大可

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
原来做实验的时候实验结束后使用1M咪唑清洗柱子，然后使用0.5M EDTA洗掉镍离子。灌入20%乙醇4度下保存。
现在不在用1M咪唑洗了，直接用EDTA洗镍，然后8M尿素洗胶，然后洗掉尿素灌入20%乙醇。
GE说明书上的一种再生使用0.2M EDTA和0.5M的NaCl洗，然后使用0.5M的NaCl洗。

使用尿素洗的时候能明显看到胶有原来的浑浊态变的清亮。

[ Last edited by 月月大可 on 2010-1-26 at 13:14 ]
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2楼2010-01-26 13:12:48
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qrf0704

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
只用过一次，所以你不用再生，重新挂镍，只需要在上一次使用时，用含500 mM咪唑洗脱下来蛋白后，用去离子水彻底清洗柱子，然后用20%乙醇洗柱子，就可以了，再次使用时，只需要洗掉乙醇，就可以用你的缓冲液进行平衡了，进样。
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3楼2010-01-27 13:17:15
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小白3521

金虫 (小有名气)
好的 谢谢啦
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4楼2010-01-27 13:54:17
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