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小白3521

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白纯化后镍柱的清洗

刚纯化了蛋白,想要再次纯化同一个蛋白
需要洗柱子吗?
应该不用再生,只用清洗就行了,我看论坛上有人说用结合缓冲液(20-30mmol咪唑)洗几次就行了,有没有做过的,有具体步骤吗
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qrf0704

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
只用过一次,所以你不用再生,重新挂镍,只需要在上一次使用时,用含500 mM咪唑洗脱下来蛋白后,用去离子水彻底清洗柱子,然后用20%乙醇洗柱子,就可以了,再次使用时,只需要洗掉乙醇,就可以用你的缓冲液进行平衡了,进样。
3楼2010-01-27 13:17:15
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月月大可

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
原来做实验的时候实验结束后使用1M咪唑清洗柱子,然后使用0.5M EDTA洗掉镍离子。灌入20%乙醇4度下保存。
现在不在用1M咪唑洗了,直接用EDTA洗镍,然后8M尿素洗胶,然后洗掉尿素灌入20%乙醇。
GE说明书上的一种再生使用0.2M EDTA和0.5M的NaCl洗,然后使用0.5M的NaCl洗。

使用尿素洗的时候能明显看到胶有原来的浑浊态变的清亮。

[ Last edited by 月月大可 on 2010-1-26 at 13:14 ]
2楼2010-01-26 13:12:48
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