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小白3521

金虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】His-tag 镍柱纯化杂带多

纯化后电泳检测，比没纯化的杂带少了一些，但是仍然有很多杂带啊，分子量比我的目的蛋白大，有什么办法能去掉杂带呢？第一次作纯化，希望大家帮忙，谢谢

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1楼 2010-01-24 18:23:49

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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

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专业: 全球变化生态学

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

这是由his柱纯化的原理决定的。
因为蛋白质本事也是带有His的，所以如果有的杂蛋白含有较多的组氨酸或多聚组氨酸，杂蛋白就会和镍柱结合，导致纯化的效果较差。
所以，想单用镍柱将蛋白纯化到很纯，一般难度较大，除非包涵体表达。即使包涵体表达，也比较难。
所以，一般要结合其他纯化方法，比如离子交换，常用阴离子交换。或疏水层析。
合理组合使用各种纯化方法，相信可以把蛋白纯化好。