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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】His-tag 镍柱纯化 杂带多
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小白3521

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】His-tag 镍柱纯化 杂带多

纯化后电泳检测，比没纯化的杂带少了一些，但是仍然有很多杂带啊，分子量比我的目的蛋白大，有什么办法能去掉杂带呢？第一次作纯化，希望大家帮忙，谢谢
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1楼 2010-01-24 18:23:49
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这是由his柱纯化的原理决定的。
因为蛋白质本事也是带有His的，所以如果有的杂蛋白含有较多的组氨酸或多聚组氨酸，杂蛋白就会和镍柱结合，导致纯化的效果较差。
所以，想单用镍柱将蛋白纯化到很纯，一般难度较大，除非包涵体表达。即使包涵体表达，也比较难。
所以，一般要结合其他纯化方法，比如离子交换，常用阴离子交换。或疏水层析。
合理组合使用各种纯化方法，相信可以把蛋白纯化好。
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生物资源交流QQ群：1044518333
2楼2010-01-24 18:41:07
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jasco

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
同意2楼的说法

楼主如果是包涵体表达，那么用不同浓度尿素去溶解包涵体，看看那个浓度溶解的包涵体中目的蛋白最纯

还可以尝试添加一定浓度的咪唑在样品中，让非特异性吸附的蛋白在过柱子的时候流穿

再就是如2楼说的，+离子交换，+疏水

加油！
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3楼2010-01-25 15:57:08
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