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小白3521

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】His-tag 镍柱纯化 杂带多

纯化后电泳检测,比没纯化的杂带少了一些,但是仍然有很多杂带啊,分子量比我的目的蛋白大,有什么办法能去掉杂带呢?第一次作纯化,希望大家帮忙,谢谢
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jasco

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
同意2楼的说法

楼主如果是包涵体表达,那么用不同浓度尿素去溶解包涵体,看看那个浓度溶解的包涵体中目的蛋白最纯

还可以尝试添加一定浓度的咪唑在样品中,让非特异性吸附的蛋白在过柱子的时候流穿

再就是如2楼说的,+离子交换,+疏水

加油!
3楼2010-01-25 15:57:08
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这是由his柱纯化的原理决定的。
因为蛋白质本事也是带有His的,所以如果有的杂蛋白含有较多的组氨酸或多聚组氨酸,杂蛋白就会和镍柱结合,导致纯化的效果较差。
所以,想单用镍柱将蛋白纯化到很纯,一般难度较大,除非包涵体表达。即使包涵体表达,也比较难。
所以,一般要结合其他纯化方法,比如离子交换,常用阴离子交换。或疏水层析。
合理组合使用各种纯化方法,相信可以把蛋白纯化好。
VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
2楼2010-01-24 18:41:07
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