应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助细胞处理的方法
91/1返回列表
查看: 669  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

vanilla2334

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求助细胞处理的方法

我用我的药品做了一组抗肿瘤实验，现在需要将细胞回收并对反应后的细胞液进行HPLC分析，请问如何除去细胞液中的蛋白质？胞外和胞内的细胞液应该怎么获取和处理？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-01-12 14:14:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwyy0818

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0): 1-12 17:19
vanilla2334(金币+2,VIP+0): 1-13 13:03
细胞外的：离心一下细胞，洗涤，然后取上清即可
细胞内液：肯定是需要破膜才能打开细胞内液，但是一破膜的话，必然就含有大量的蛋白。你要做HPLC，估计是分析一些小分子或多肽的表达差异吧？对于一些大的蛋白质，你可以通过硫氨沉淀来去除，也可以通过超滤管来实现。
ps：我只知道如何去除大分子的蛋白质，小分子的，不得而知。
赞一下(24人) 回复此楼
2楼2010-01-12 17:11:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hhwang

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
vanilla2334(金币+2,VIP+0): 1-13 13:03
vanilla2334(金币+1,VIP+0): 1-13 13:03
补充一下 最好能把你要提的蛋白纯化出来
HPLC的灵敏度太高，稍微杂质就会影响很大
赞一下(7人) 回复此楼
3楼2010-01-12 22:57:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vanilla2334

新虫 (初入文坛)
谢谢楼上的朋友，我分析的是中药材里的天然产物做了抗肿瘤之后，肿瘤细胞液的HPLC分析，就是怕有蛋白会堵柱子，很头痛呢
赞一下 回复此楼
4楼2010-01-13 13:06:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwyy0818

新虫 (小有名气)
★
vanilla2334(金币+1,VIP+0): 1-14 15:22
引用回帖:
Originally posted by vanilla2334 at 2010-1-13 13:06:
谢谢楼上的朋友，我分析的是中药材里的天然产物做了抗肿瘤之后，肿瘤细胞液的HPLC分析，就是怕有蛋白会堵柱子，很头痛呢

呵呵，那就用截留分子量为1KDa的超滤过来处理一下吧
赞一下(3人) 回复此楼
5楼2010-01-13 13:13:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwyy0818

新虫 (小有名气)
★
vanilla2334(金币+1,VIP+0):5 1-14 15:22
引用回帖:
Originally posted by vanilla2334 at 2010-1-13 13:06:
谢谢楼上的朋友，我分析的是中药材里的天然产物做了抗肿瘤之后，肿瘤细胞液的HPLC分析，就是怕有蛋白会堵柱子，很头痛呢

另外，不知道你用的是C18还是C8还是C4或者是其它柱子？
赞一下(3人) 回复此楼
6楼2010-01-13 13:14:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ysxnj
★
vanilla2334(金币+1,VIP+0): 1-14 15:22
7楼2010-01-13 23:48:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vanilla2334

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by wwyy0818 at 2010-1-13 13:14:

另外，不知道你用的是C18还是C8还是C4或者是其它柱子？

我用的是反向C18柱子，我们实验室上样前用的是0.45微米的过滤膜。
赞一下 回复此楼
8楼2010-01-14 15:23:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwyy0818

新虫 (小有名气)
★
vanilla2334(金币+1,VIP+0): 1-21 14:32
引用回帖:
Originally posted by vanilla2334 at 2010-1-14 15:23:

我用的是反向C18柱子，我们实验室上样前用的是0.45微米的过滤膜。

那你就用超滤管（截留分子了为1万Da）的来处理一下。
ps：HPLC对样品的要求为0.25um的膜过滤，FPLC才是0.45um。
赞一下(2人) 回复此楼
9楼2010-01-15 11:08:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 vanilla2334 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭