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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助细胞处理的方法
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vanilla2334

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求助细胞处理的方法

我用我的药品做了一组抗肿瘤实验，现在需要将细胞回收并对反应后的细胞液进行HPLC分析，请问如何除去细胞液中的蛋白质？胞外和胞内的细胞液应该怎么获取和处理？
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1楼 2010-01-12 14:14:33
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wwyy0818

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0): 1-12 17:19
vanilla2334(金币+2,VIP+0): 1-13 13:03
细胞外的：离心一下细胞，洗涤，然后取上清即可
细胞内液：肯定是需要破膜才能打开细胞内液，但是一破膜的话，必然就含有大量的蛋白。你要做HPLC，估计是分析一些小分子或多肽的表达差异吧？对于一些大的蛋白质，你可以通过硫氨沉淀来去除，也可以通过超滤管来实现。
ps：我只知道如何去除大分子的蛋白质，小分子的，不得而知。
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2楼2010-01-12 17:11:03
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hhwang

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
vanilla2334(金币+2,VIP+0): 1-13 13:03
vanilla2334(金币+1,VIP+0): 1-13 13:03
补充一下 最好能把你要提的蛋白纯化出来
HPLC的灵敏度太高，稍微杂质就会影响很大
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3楼2010-01-12 22:57:23
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vanilla2334

新虫 (初入文坛)
谢谢楼上的朋友，我分析的是中药材里的天然产物做了抗肿瘤之后，肿瘤细胞液的HPLC分析，就是怕有蛋白会堵柱子，很头痛呢
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4楼2010-01-13 13:06:51
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wwyy0818

新虫 (小有名气)
★
vanilla2334(金币+1,VIP+0): 1-14 15:22
引用回帖:
Originally posted by vanilla2334 at 2010-1-13 13:06:
谢谢楼上的朋友，我分析的是中药材里的天然产物做了抗肿瘤之后，肿瘤细胞液的HPLC分析，就是怕有蛋白会堵柱子，很头痛呢

呵呵，那就用截留分子量为1KDa的超滤过来处理一下吧
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5楼2010-01-13 13:13:53
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wwyy0818

新虫 (小有名气)
★
vanilla2334(金币+1,VIP+0):5 1-14 15:22
引用回帖:
Originally posted by vanilla2334 at 2010-1-13 13:06:
谢谢楼上的朋友，我分析的是中药材里的天然产物做了抗肿瘤之后，肿瘤细胞液的HPLC分析，就是怕有蛋白会堵柱子，很头痛呢

另外，不知道你用的是C18还是C8还是C4或者是其它柱子？
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6楼2010-01-13 13:14:34
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ysxnj
★
vanilla2334(金币+1,VIP+0): 1-14 15:22
7楼2010-01-13 23:48:57
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vanilla2334

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by wwyy0818 at 2010-1-13 13:14:

另外，不知道你用的是C18还是C8还是C4或者是其它柱子？

我用的是反向C18柱子，我们实验室上样前用的是0.45微米的过滤膜。
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8楼2010-01-14 15:23:52
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wwyy0818

新虫 (小有名气)
★
vanilla2334(金币+1,VIP+0): 1-21 14:32
引用回帖:
Originally posted by vanilla2334 at 2010-1-14 15:23:

我用的是反向C18柱子，我们实验室上样前用的是0.45微米的过滤膜。

那你就用超滤管（截留分子了为1万Da）的来处理一下。
ps：HPLC对样品的要求为0.25um的膜过滤，FPLC才是0.45um。
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9楼2010-01-15 11:08:16
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