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vanilla2334

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求助细胞处理的方法

我用我的药品做了一组抗肿瘤实验,现在需要将细胞回收并对反应后的细胞液进行HPLC分析,请问如何除去细胞液中的蛋白质?胞外和胞内的细胞液应该怎么获取和处理?
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wwyy0818

新虫 (小有名气)


vanilla2334(金币+1,VIP+0): 1-14 15:22
引用回帖:
Originally posted by vanilla2334 at 2010-1-13 13:06:
谢谢楼上的朋友,我分析的是中药材里的天然产物做了抗肿瘤之后,肿瘤细胞液的HPLC分析,就是怕有蛋白会堵柱子,很头痛呢

呵呵,那就用截留分子量为1KDa的超滤过来处理一下吧
5楼2010-01-13 13:13:53
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wwyy0818

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0): 1-12 17:19
vanilla2334(金币+2,VIP+0): 1-13 13:03
细胞外的:离心一下细胞,洗涤,然后取上清即可
细胞内液:肯定是需要破膜才能打开细胞内液,但是一破膜的话,必然就含有大量的蛋白。你要做HPLC,估计是分析一些小分子或多肽的表达差异吧?对于一些大的蛋白质,你可以通过硫氨沉淀来去除,也可以通过超滤管来实现。
ps:我只知道如何去除大分子的蛋白质,小分子的,不得而知。
2楼2010-01-12 17:11:03
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hhwang

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
vanilla2334(金币+2,VIP+0): 1-13 13:03
vanilla2334(金币+1,VIP+0): 1-13 13:03
补充一下 最好能把你要提的蛋白纯化出来
HPLC的灵敏度太高,稍微杂质就会影响很大
3楼2010-01-12 22:57:23
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vanilla2334

新虫 (初入文坛)

谢谢楼上的朋友,我分析的是中药材里的天然产物做了抗肿瘤之后,肿瘤细胞液的HPLC分析,就是怕有蛋白会堵柱子,很头痛呢
4楼2010-01-13 13:06:51
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