应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】引物的Tm值到底以哪个为准
191/2返回列表12下一页
查看: 2785  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

xiaorong-er

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】引物的Tm值到底以哪个为准

我用oligo6设计出的引物Tm值要比引物公司给的值高很多，在CNBI上BLAST得到的信息其Tm值又是不一样，到底以哪个为准比较好，我基本按引物公司给的Tm值做一个梯度实验，但是有时候却什么也得不到，RNA肯定是没有问题的，因为内参的目的片段可以扩增出来的，是不是引物不行，还是温度设计的不对？还请高手指点。谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-01-10 11:17:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0): 1-10 12:52
梯度都做不出的话，多半引物问题
我们一般自己算tm
赞一下(11人) 回复此楼
2楼2010-01-10 11:43:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seahow

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0): 1-10 12:52
应用 软件 评价以下引物。
赞一下(11人) 回复此楼
3楼2010-01-10 12:01:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0): 1-10 16:06
订单上有啊
回复此楼
海纳百川止于至善
4楼2010-01-10 12:52:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1,VIP+0): 1-10 16:04
本帖仅楼主可见
赞一下
5楼2010-01-10 15:01:51
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

gaozx123

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 1-10 20:20
我本人做，一般在NCBI上设计出来后，再用primer5评价一下，可以的话，拿到公司合成。引物单上会给出一个Tm值，我们一般按照评价的温度与单子上的温度设计一个梯度温度进行PCR，一般都会有结果的。
赞一下(21人) 回复此楼
6楼2010-01-10 20:19:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yitai123

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
信不信多加一点酶也是有效果的。这是个人经验啊。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-01-10 21:30:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pengl001

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我们基本都参照oligo或者primer 5给的温度设定退火温度，引物公司的温度太低了
赞一下(1人) 回复此楼
Yes,Ican!
8楼2010-01-11 05:58:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaorong-er

金虫 (正式写手)
我一般是按照引物公司给的TM值，根据给的TM最少值的引物和最大值的引物上下3-5度进行梯度摸索的，有时候设计的引物什么条带也扩增不出来，有的条带扩增对了，但是去测序的时候得到的结果又不对，很是郁闷。我直接买的mix,所以加酶估计是不知道怎么弄了。
赞一下 回复此楼
9楼2010-01-11 09:17:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xj22667

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我一般参考的是oligo6.0上算出的 公司给出的把保护碱基和酶切位点的碱基都算进去了 不准 我认为
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-01-12 17:35:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaorong-er 的主题更新
191/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料工程281还有调剂机会吗 +24 xaw. 2026-04-11 24/1200 2026-04-12 10:32 by 猪会飞
[考研] 326求调剂 +6 Shansyn 2026-04-10 6/300 2026-04-12 09:46 by hammer3
[考研] 人工智能320调剂08工类还有机会吗 +12 振—TZ 2026-04-10 12/600 2026-04-12 07:54 by wj165256
[考研] 316求调剂 +5 想读研究生( ?∵ 2026-04-07 5/250 2026-04-12 00:43 by 蓝云思雨
[考研] 22专硕求调剂 +6 haoyun上岸 2026-04-11 8/400 2026-04-11 23:21 by labixiaoqiao
[考研] 277 数一104，学硕，求调剂 +21 瓶子PZ 2026-04-09 23/1150 2026-04-11 23:12 by labixiaoqiao
[考研] 284求调剂 +11 archer.. 2026-04-09 12/600 2026-04-11 20:23 by 蓝云思雨
[考研] 295求调剂 +6 ?要上岸? 2026-04-05 7/350 2026-04-11 19:02 by laoshidan
[考研] 352 求调剂 +6 yzion 2026-04-11 8/400 2026-04-11 16:24 by 明月此时有
[考研] 298求调剂 +5 残荷新柳 2026-04-07 5/250 2026-04-11 11:02 by 紫曦紫棋
[考研] 297求调剂 +9 Kwgyz 2026-04-09 9/450 2026-04-11 10:09 by zhq0425
[考研] 346，工科求调剂 +3 moser233 2026-04-09 3/150 2026-04-11 10:04 by zhq0425
[考研] 281求调剂 +11 觉得好的吧 2026-04-10 11/550 2026-04-11 09:35 by 逆水乘风
[考研] 080500求调剂 +17 黄宇博 2026-04-06 17/850 2026-04-11 08:36 by zhq0425
[考研] 一志愿北理工298英一数二已上岸，感谢各位老师 +14 Reframe 2026-04-10 16/800 2026-04-10 23:07 by caotw2020
[考研] 求调剂288 +6 ioodiiij 2026-04-10 8/400 2026-04-10 21:07 by zhouxiaoyu
[考研] 吉大计算机技术331分，英语六级，求调剂 +3 峰峰021116 2026-04-09 3/150 2026-04-10 20:01 by chemisry
[考研] 22408 366分，本科211，一志愿西工大 +4 Rubt 2026-04-09 4/200 2026-04-10 19:51 by chemisry
[考研] 求调剂希望还是希望在山河四省附近 +3 快乐的小白鸽 2026-04-05 3/150 2026-04-09 17:36 by wp06
[考研] 086000生物与医药调剂 +7 awwwwwooooo 2026-04-09 7/350 2026-04-09 13:31 by 北极159263
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭