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xiaorong-er

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】引物的Tm值到底以哪个为准

我用oligo6设计出的引物Tm值要比引物公司给的值高很多,在CNBI上BLAST得到的信息其Tm值又是不一样,到底以哪个为准比较好,我基本按引物公司给的Tm值做一个梯度实验,但是有时候却什么也得不到,RNA肯定是没有问题的,因为内参的目的片段可以扩增出来的,是不是引物不行,还是温度设计的不对?还请高手指点。谢谢!
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匿名

用户注销 (著名写手)

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司马诸葛(金币+1,VIP+0): 1-10 16:04
本帖仅楼主可见
5楼2010-01-10 15:01:51
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yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主

★ ★
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1949stone(金币+1,VIP+0): 1-10 12:52
梯度都做不出的话,多半引物问题
我们一般自己算tm
2楼2010-01-10 11:43:02
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seahow

木虫 (著名写手)

★ ★
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1949stone(金币+1,VIP+0): 1-10 12:52
应用 软件 评价以下引物。
3楼2010-01-10 12:01:25
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gaozx123

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0): 1-10 20:20
我本人做,一般在NCBI上设计出来后,再用primer5评价一下,可以的话,拿到公司合成。引物单上会给出一个Tm值,我们一般按照评价的温度与单子上的温度设计一个梯度温度进行PCR,一般都会有结果的。
6楼2010-01-10 20:19:32
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