24小时热门版块排行榜    

查看: 3066  |  回复: 18
当前主题已经存档。

xiaorong-er

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】引物的Tm值到底以哪个为准

我用oligo6设计出的引物Tm值要比引物公司给的值高很多,在CNBI上BLAST得到的信息其Tm值又是不一样,到底以哪个为准比较好,我基本按引物公司给的Tm值做一个梯度实验,但是有时候却什么也得不到,RNA肯定是没有问题的,因为内参的目的片段可以扩增出来的,是不是引物不行,还是温度设计的不对?还请高手指点。谢谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0): 1-10 12:52
梯度都做不出的话,多半引物问题
我们一般自己算tm
2楼2010-01-10 11:43:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seahow

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0): 1-10 12:52
应用 软件 评价以下引物。
3楼2010-01-10 12:01:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川

★
司马诸葛(金币+1,VIP+0): 1-10 16:06
订单上有啊
海纳百川止于至善
4楼2010-01-10 12:52:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1,VIP+0): 1-10 16:04
本帖仅楼主可见
5楼2010-01-10 15:01:51
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

gaozx123

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 1-10 20:20
我本人做,一般在NCBI上设计出来后,再用primer5评价一下,可以的话,拿到公司合成。引物单上会给出一个Tm值,我们一般按照评价的温度与单子上的温度设计一个梯度温度进行PCR,一般都会有结果的。
6楼2010-01-10 20:19:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yitai123

铁虫 (初入文坛)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
信不信多加一点酶也是有效果的。这是个人经验啊。
7楼2010-01-10 21:30:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pengl001

木虫 (小有名气)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我们基本都参照oligo或者primer 5给的温度设定退火温度,引物公司的温度太低了
Yes,Ican!
8楼2010-01-11 05:58:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaorong-er

金虫 (正式写手)

我一般是按照引物公司给的TM值,根据给的TM最少值的引物和最大值的引物上下3-5度进行梯度摸索的,有时候设计的引物什么条带也扩增不出来,有的条带扩增对了,但是去测序的时候得到的结果又不对,很是郁闷。我直接买的mix,所以加酶估计是不知道怎么弄了。
9楼2010-01-11 09:17:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xj22667

银虫 (小有名气)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我一般参考的是oligo6.0上算出的 公司给出的把保护碱基和酶切位点的碱基都算进去了 不准 我认为
10楼2010-01-12 17:35:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaorong-er 的主题更新
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:54 by Z7qfCsdIiD1T
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 8/400 2026-11-11 01:49 by Z7qfCsdIiD1T
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:15 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:13 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:10 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 5/250 2026-11-11 00:59 by Z7qfCsdIiD1T
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 5/250 2026-11-11 00:53 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 4/200 2026-11-10 22:39 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 5/250 2026-11-10 20:45 by Z7qfCsdIiD1T
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 5/250 2026-11-10 20:12 by Z7qfCsdIiD1T
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 5/250 2026-11-10 19:45 by Z7qfCsdIiD1T
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 4/200 2026-11-10 19:39 by Z7qfCsdIiD1T
[文学芳草园] 厉娜 +3 张丹枫1991 2026-11-09 5/250 2026-11-09 16:53 by 张丹枫1991
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 11:52 by GwrQVVR6Oenx
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 12/600 2026-11-09 06:32 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
信息提示
请填处理意见