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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】基因组DNA用Mse I酶切后，琼脂糖电泳为什么没有跑出弥散区？
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sunnyci

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】基因组DNA用Mse I酶切后，琼脂糖电泳为什么没有跑出弥散区？

最近将基因组DNA用MseI来酶切，体系为20微升：genomic DNA（100ng/uL)  5uL,10*Buffer 2uL,Mse I 0.5 uL)，酶切65度3小时，但是用1%琼脂糖电泳，什么都没有跑出来，但是后续工作中，连接完Mse I接头 再用PCR后，就有了弥散区，大概在100-1000之间，请问这正常吗？酶切产物跑不出东西是什么原因，谢谢大家了
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1楼 2010-01-08 11:03:18
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xyls6868

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
先替你顶一下吧呵呵，我也出现过这种问题，我以为是DNA浓度太小了，是不是检测除问题了呢？
可以在检测酶切产物的时候旁边点一个DNA做对照，看是不是DNA的原因
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2楼2010-01-08 11:07:10
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酶切温度65度是不是太高了啊，我怎么记得65度都能灭活了，不过你检测的什么也没看到是正常的，DNA被酶切后就是什么都看不到的，除非DNA量比较大
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3楼2010-01-08 12:05:04
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xyls6868

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-1-8 12:05:
酶切温度65度是不是太高了啊，我怎么记得65度都能灭活了，不过你检测的什么也没看到是正常的，DNA被酶切后就是什么都看不到的，除非DNA量比较大

是有65°酶的，呵呵在这个温度下，活性最大。但是酶切后什么都看不到没有道理吧呵呵
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4楼2010-01-08 12:09:02
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by xyls6868 at 2010-1-8 12:09:

是有65°酶的，呵呵在这个温度下，活性最大。但是酶切后什么都看不到没有道理吧呵呵

酶切后基因组成弥散状态，但是由于量小，均匀分布，就看不到了，非常正常，我们一般检测，就认为看不到就是好的，看了往下做就要稀释
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5楼2010-01-08 12:10:44
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xyls6868

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
最好还是要检测到吧呵呵，量太小的话，后面的pcr是不是也受影响呢？
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6楼2010-01-08 15:14:49
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
你的酶很奇特。。。
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7楼2010-01-09 09:26:30
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