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sunnyci

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】基因组DNA用Mse I酶切后,琼脂糖电泳为什么没有跑出弥散区?

最近将基因组DNA用MseI来酶切,体系为20微升:genomic DNA(100ng/uL)  5uL,10*Buffer 2uL,Mse I 0.5 uL),酶切65度3小时,但是用1%琼脂糖电泳,什么都没有跑出来,但是后续工作中,连接完Mse I接头 再用PCR后,就有了弥散区,大概在100-1000之间,请问这正常吗?酶切产物跑不出东西是什么原因,谢谢大家了
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xyls6868

新虫 (小有名气)


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先替你顶一下吧呵呵,我也出现过这种问题,我以为是DNA浓度太小了,是不是检测除问题了呢?
可以在检测酶切产物的时候旁边点一个DNA做对照,看是不是DNA的原因
2楼2010-01-08 11:07:10
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


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酶切温度65度是不是太高了啊,我怎么记得65度都能灭活了,不过你检测的什么也没看到是正常的,DNA被酶切后就是什么都看不到的,除非DNA量比较大
3楼2010-01-08 12:05:04
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xyls6868

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-1-8 12:05:
酶切温度65度是不是太高了啊,我怎么记得65度都能灭活了,不过你检测的什么也没看到是正常的,DNA被酶切后就是什么都看不到的,除非DNA量比较大

是有65°酶的,呵呵在这个温度下,活性最大。但是酶切后什么都看不到没有道理吧呵呵
4楼2010-01-08 12:09:02
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


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引用回帖:
Originally posted by xyls6868 at 2010-1-8 12:09:

是有65°酶的,呵呵在这个温度下,活性最大。但是酶切后什么都看不到没有道理吧呵呵

酶切后基因组成弥散状态,但是由于量小,均匀分布,就看不到了,非常正常,我们一般检测,就认为看不到就是好的,看了往下做就要稀释
5楼2010-01-08 12:10:44
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xyls6868

新虫 (小有名气)


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最好还是要检测到吧呵呵,量太小的话,后面的pcr是不是也受影响呢?
6楼2010-01-08 15:14:49
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)


你的酶很奇特。。。
7楼2010-01-09 09:26:30
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