应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求救-新基因的克隆
101/1返回列表
查看: 808  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

yygz5128

[交流] 【求助/交流】求救-新基因的克隆

我现在正在克隆一个新基因，根据其已知的氨基酸序列通过兼并PCR的方法已经获得中间的部分序列（没有同源性，只知道氨基酸序列），买了CLOTECH的RACE试剂盒想获得全长CDNA，一直没有结果，请问还有哪些比较好的末端克隆的方法，请高手们指教，万分感谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2010-01-05 23:26:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyanyy

新虫 (正式写手)
通过染色体步移的方法
赞一下 回复此楼
2楼2010-01-05 23:33:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
clontech的盒子足够好了，一定可以做出来的，可以多设计几个引物，一次出不来，做巢式PCR，多种组合的巢式PCR
一般情况3’-RACE比较容易，但是5‘-RACE可能相对困难，但是用clontech的盒子很好用，问题不大
另外注意设计引物的时候避免以A结尾，尽量以T结尾
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-01-06 16:23:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yygz5128

也尝试了染色体步移的方法，值得到部分序列，连已知的序列都没有全部出来，奇怪了
赞一下 回复此楼
4楼2010-01-17 22:36:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yygz5128

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-1-6 16:23:
clontech的盒子足够好了，一定可以做出来的，可以多设计几个引物，一次出不来，做巢式PCR，多种组合的巢式PCR
一般情况3’-RACE比较容易，但是5‘-RACE可能相对困难，但是用clontech的盒子很好用，问题不大
另外 ...

你说的我都试了，引物差不多设计了10对了，一直没有结果，巢式PCR也只是模糊的一片，哎，郁闷了
赞一下 回复此楼
5楼2010-01-17 22:38:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
先攻3'race，这个容易些
赞一下 回复此楼
6楼2010-01-18 11:06:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qianggene

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也是啊，5'做了两个月了，单一条带都出来了，可就是不对，我都无奈了~
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-01-18 13:49:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-1-6 16:23:
clontech的盒子足够好了，一定可以做出来的，可以多设计几个引物，一次出不来，做巢式PCR，多种组合的巢式PCR
一般情况3’-RACE比较容易，但是5‘-RACE可能相对困难，但是用clontech的盒子很好用，问题不大
另外 ...

非常同意
回复此楼
8楼2010-01-18 15:59:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by yygz5128 at 2010-1-17 22:38:

你说的我都试了，引物差不多设计了10对了，一直没有结果，巢式PCR也只是模糊的一片，哎，郁闷了

这种情况，我怀疑跟你的RNA有关系，是不是基因丰度太低，我一般设计两对3’RACE就能跑出来，很多情况是两对引物都效果较好，我选择较长的那个测序，以备有足够长的序列设计5‘RACE
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-01-18 16:01:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

段家一凡

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
Clontech的应该是做5‘Race最好的试剂盒了，我想你应该吧引物尽量设计的Tm值高一点，直接用72度完事
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-01-18 21:47:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yygz5128 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 4/200 2026-11-11 08:34 by 1Nb0IVlmV6v0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 6/300 2026-11-11 07:06 by Z7qfCsdIiD1T
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 5/250 2026-11-11 07:03 by Z7qfCsdIiD1T
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 9/450 2026-11-11 04:54 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 04:32 by Z7qfCsdIiD1T
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 7/350 2026-11-11 04:21 by Z7qfCsdIiD1T
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 6/300 2026-11-11 03:56 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:10 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 4/200 2026-11-10 22:39 by Z7qfCsdIiD1T
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 4/200 2026-11-10 20:51 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”：确已离世，正核实举报内容 +4 yexuqing 2026-11-04 6/300 2026-11-10 11:13 by susizheng
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 15/750 2026-11-09 13:19 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 16/800 2026-11-09 11:47 by GwrQVVR6Oenx
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 15/750 2026-11-09 11:41 by GwrQVVR6Oenx
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-08 23:01 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭