应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求救-新基因的克隆
汕头大学海洋科学接受调剂
101/1返回列表
查看: 608  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

yygz5128

[交流] 【求助/交流】求救-新基因的克隆

我现在正在克隆一个新基因，根据其已知的氨基酸序列通过兼并PCR的方法已经获得中间的部分序列（没有同源性，只知道氨基酸序列），买了CLOTECH的RACE试剂盒想获得全长CDNA，一直没有结果，请问还有哪些比较好的末端克隆的方法，请高手们指教，万分感谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2010-01-05 23:26:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyanyy

新虫 (正式写手)
通过染色体步移的方法
赞一下 回复此楼
2楼2010-01-05 23:33:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
clontech的盒子足够好了，一定可以做出来的，可以多设计几个引物，一次出不来，做巢式PCR，多种组合的巢式PCR
一般情况3’-RACE比较容易，但是5‘-RACE可能相对困难，但是用clontech的盒子很好用，问题不大
另外注意设计引物的时候避免以A结尾，尽量以T结尾
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-01-06 16:23:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yygz5128

也尝试了染色体步移的方法，值得到部分序列，连已知的序列都没有全部出来，奇怪了
赞一下 回复此楼
4楼2010-01-17 22:36:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yygz5128

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-1-6 16:23:
clontech的盒子足够好了，一定可以做出来的，可以多设计几个引物，一次出不来，做巢式PCR，多种组合的巢式PCR
一般情况3’-RACE比较容易，但是5‘-RACE可能相对困难，但是用clontech的盒子很好用，问题不大
另外 ...

你说的我都试了，引物差不多设计了10对了，一直没有结果，巢式PCR也只是模糊的一片，哎，郁闷了
赞一下 回复此楼
5楼2010-01-17 22:38:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
先攻3'race，这个容易些
赞一下 回复此楼
6楼2010-01-18 11:06:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qianggene

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也是啊，5'做了两个月了，单一条带都出来了，可就是不对，我都无奈了~
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-01-18 13:49:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-1-6 16:23:
clontech的盒子足够好了，一定可以做出来的，可以多设计几个引物，一次出不来，做巢式PCR，多种组合的巢式PCR
一般情况3’-RACE比较容易，但是5‘-RACE可能相对困难，但是用clontech的盒子很好用，问题不大
另外 ...

非常同意
回复此楼
8楼2010-01-18 15:59:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by yygz5128 at 2010-1-17 22:38:

你说的我都试了，引物差不多设计了10对了，一直没有结果，巢式PCR也只是模糊的一片，哎，郁闷了

这种情况，我怀疑跟你的RNA有关系，是不是基因丰度太低，我一般设计两对3’RACE就能跑出来，很多情况是两对引物都效果较好，我选择较长的那个测序，以备有足够长的序列设计5‘RACE
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-01-18 16:01:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

段家一凡

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
Clontech的应该是做5‘Race最好的试剂盒了，我想你应该吧引物尽量设计的Tm值高一点，直接用72度完事
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-01-18 21:47:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yygz5128 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 药学求调剂 +11 喽哈加油 2026-04-14 13/650 2026-04-14 21:14 by qingfeng258
[考研] 273求调剂 +4 白居不易. 2026-04-09 6/300 2026-04-14 19:54 by 逆水乘风
[考研] 08工学 309分求调剂 +12 Yin DY 2026-04-08 12/600 2026-04-14 17:49 by lhj2009
[考研] 071000生物学调剂求助 +18 zzzzwww 2026-04-09 21/1050 2026-04-14 15:39 by zs92450
[考研] 一志愿沪9，326求生物学调剂 +10 刘墨墨 2026-04-13 10/500 2026-04-14 15:16 by zs92450
[基金申请] RY：中国产出的科学垃圾论文，绝对数量和比例都世界第一 +6 zju2000 2026-04-14 17/850 2026-04-14 14:34 by jurkat.1640
[考研] 105500药学求调剂 +4 x_skys 2026-04-12 4/200 2026-04-14 13:37 by rndfc
[考研] 农学0904 312求调剂 +4 Say Never 2026-04-11 4/200 2026-04-14 09:10 by zs92450
[考研] 求调剂，985材料与化工348分 +9 涵竹刘 2026-04-11 14/700 2026-04-13 22:26 by 涵竹刘
[考研] 2026硕士调剂_能动_河南农业大学 +4 河南农业大学-能 2026-04-12 4/200 2026-04-13 22:01 by bljnqdcc
[考研] 322求调剂，08工科 +4 今天是个小号 2026-04-08 4/200 2026-04-13 00:20 by baobaoye
[考研] 344 材料专业 求调剂211 无地域要求 +8 hualkop 2026-04-11 8/400 2026-04-12 22:24 by fqwang
[考研] 299求调剂 +8 ZVVZ13 2026-04-08 8/400 2026-04-12 00:40 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿厦大0856，306求调剂 +15 Bblinging 2026-04-11 15/750 2026-04-11 22:53 by 314126402
[考研] 调剂 化学 307 +21 73372112 2026-04-09 23/1150 2026-04-10 23:53 by wj165256
[考研] 284求调剂 +9 让我上岸吧阿西 2026-04-09 11/550 2026-04-10 19:18 by 靖jing
[论文投稿] mdpi小修rvr时间四五天了 20+3 哈哈high 2026-04-08 5/250 2026-04-10 16:02 by 北京莱茵润色
[考研] 一志愿沪9，326生物学求相关专业调剂 +4 刘墨墨 2026-04-09 4/200 2026-04-10 12:07 by pengliang8036
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +3 LZH（等待调剂中 2026-04-09 3/150 2026-04-09 21:29 by wutongshun
[论文投稿] 求助文献原文 10+3 18500821399 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:56 by 北京莱茵润色
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭