应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】taq-Pfu
121/2返回列表12下一页
查看: 875  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 xiangao 的 4 个金币

xiangao

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】taq-Pfu

用taq 酶在一温度下p一段基因，没有问题而且特异性很好。
但是改成用Pfu酶p这段基因，延伸时间加倍，就是p不出来，而且上下也摸索了几个温度也没p出来，好奇怪啊！！！！Pfu酶本身应该没问题
请帮忙分析原因  ！！！！！！！！！！！！！！
纠结中！！！！！！！！！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-01-03 17:30:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

米菲的旋律

木虫 (著名写手)

Always Keep The Faith！
★ ★ ★
xiangao(金币+2,VIP+0):谢谢应助 1-3 18:28
1949stone(金币+1,VIP+0):再奖一次 1-3 19:52
pfu活性较低，延伸速度慢，对溶液要求高。
我曾用过fermentas的pfu，牌子应该是不错了，也没p出来。原因就是模板是手提的，残留不少有害物质。我的解决办法是镁离子浓度。

你可以尝试提高镁离子浓度，（但是注意，镁离子浓度过高，影响pfu特异性）。
赞一下(12人) 回复此楼
物必先腐而后虫生
2楼2010-01-03 18:21:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangao

金虫 (正式写手)
这样的问题好像不多见 ，，大家遇到过没？
赞一下 回复此楼
3楼2010-01-03 18:30:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
amisking(金币+1,VIP+0): 1-3 19:04
xiangao(金币+1,VIP+0): 1-4 14:13
pfu和pfx的扩增能力就是差点的啦，所以我现在习惯用具有一定保证性的Taq或者Taq与Pfu混合酶
赞一下(21人) 回复此楼
4楼2010-01-03 19:01:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)
★
xiangao(金币+1,VIP+0): 1-4 14:13
没碰到过，当时第一次做的时候简直太顺手了
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-01-03 20:47:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)
★
xiangao(金币+1,VIP+0): 1-4 14:13
是不是用配套的PFU的buffer? 如果不是配套的，有可能扩不出来，因为离子浓度不一样，pfu的浓度高，需要的变性温度也高。我之前用TAq但是用pfu的buffer，怎么也扩不出来，但是用相应的酶就扩出来了。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-01-04 01:34:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★
xiangao(金币+1,VIP+0): 1-4 14:12
很正常，特异性高了扩增效率肯定会低的。你可以用一下taq plus，保真性也不错，扩增效率跟taq差不多
赞一下(2人) 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
7楼2010-01-04 08:54:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lansha8331

无虫 (小有名气)
很正常，pfu酶保真性好，但代价就是需要的条件苛刻，扩增效率不高，但只要扩出来的，出错率极低。如果用Taq酶就能扩出来，干吗还用pfu啊，除非是为了测序
赞一下 回复此楼
8楼2010-03-18 11:33:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lansha8331

无虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lansha8331 at 2010-03-18 11:33:05:
很正常，pfu酶保真性好，但代价就是需要的条件苛刻，扩增效率不高，但只要扩出来的，出错率极低。如果用Taq酶就能扩出来，干吗还用pfu啊，除非是为了测序

另外推荐威格拉斯公司的Taq和pfu酶
赞一下 回复此楼
9楼2010-03-18 11:33:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)
我感觉有可能是手提模板含有杂质太多赵城的 可以试试用基因组试剂盒提一下看看 pfu酶的扩增效率比较低 另外可以适当的降低一下退火温度 用touchdown pcr试试
赞一下 回复此楼
10楼2010-03-18 14:28:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiangao 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自然面上和省基金B类撒花 +17 花田半亩～白 2026-04-21 17/850 2026-04-23 07:30 by john198197
[考研] 有没有学校收留 +3 蒋昌鹏qtj 2026-04-20 3/150 2026-04-22 20:25 by 学员JpLReM
[考研] 312求调剂 +3 山河似你温柔 2026-04-22 3/150 2026-04-22 20:17 by 学员JpLReM
[考博] 华师大读博 +3 xq83 2026-04-22 5/250 2026-04-22 10:42 by xq83
[教师之家] 又一批高校组建人工智能学院 师资行吗 不是骗人吗 +5 yexuqing 2026-04-19 5/250 2026-04-22 10:01 by easeheart
[论文投稿] 急需审稿人！！！ +3 陆小果画大饼 2026-04-21 3/150 2026-04-21 23:54 by jzy_123456
[考博] 申博/考博 +4 啃面包的小书虫 2026-04-17 8/400 2026-04-21 16:26 by 啃面包的小书虫
[考研] 295分求调剂 +6 ?要上岸? 2026-04-17 6/300 2026-04-21 08:18 by Equinoxhua
[考研] 085600材料与化工调剂 5+3 孜孜不倦2002 2026-04-19 6/300 2026-04-20 21:25 by babero
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀，最好在一个月之内的，研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 7/350 2026-04-20 15:45 by 豆豆7758
[考博] 申博 +3 Xyyx. 2026-04-18 3/150 2026-04-20 10:44 by YuY66
[考博] 湖南大学刘巧玲课题组2026年第二批次博士研究生招生信息 +3 南风观火 2026-04-18 5/250 2026-04-20 10:13 by 南风观火
[考研] 求计算机方向调剂 +3 Toffee2 2026-04-16 6/300 2026-04-19 22:37 by ll叶
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 求调剂 +10 小聂爱学习 2026-04-16 12/600 2026-04-19 16:51 by 中豫男
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭