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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】taq-Pfu
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xiangao

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】taq-Pfu

用taq 酶在一温度下p一段基因，没有问题而且特异性很好。
但是改成用Pfu酶p这段基因，延伸时间加倍，就是p不出来，而且上下也摸索了几个温度也没p出来，好奇怪啊！！！！Pfu酶本身应该没问题
请帮忙分析原因  ！！！！！！！！！！！！！！
纠结中！！！！！！！！！！
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1楼 2010-01-03 17:30:55
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gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)
★
xiangao(金币+1,VIP+0): 1-4 14:13
是不是用配套的PFU的buffer? 如果不是配套的，有可能扩不出来，因为离子浓度不一样，pfu的浓度高，需要的变性温度也高。我之前用TAq但是用pfu的buffer，怎么也扩不出来，但是用相应的酶就扩出来了。
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6楼2010-01-04 01:34:50
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米菲的旋律

木虫 (著名写手)

Always Keep The Faith！
★ ★ ★
xiangao(金币+2,VIP+0):谢谢应助 1-3 18:28
1949stone(金币+1,VIP+0):再奖一次 1-3 19:52
pfu活性较低，延伸速度慢，对溶液要求高。
我曾用过fermentas的pfu，牌子应该是不错了，也没p出来。原因就是模板是手提的，残留不少有害物质。我的解决办法是镁离子浓度。

你可以尝试提高镁离子浓度，（但是注意，镁离子浓度过高，影响pfu特异性）。
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物必先腐而后虫生
2楼2010-01-03 18:21:13
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xiangao

金虫 (正式写手)
这样的问题好像不多见 ，，大家遇到过没？
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3楼2010-01-03 18:30:13
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
amisking(金币+1,VIP+0): 1-3 19:04
xiangao(金币+1,VIP+0): 1-4 14:13
pfu和pfx的扩增能力就是差点的啦，所以我现在习惯用具有一定保证性的Taq或者Taq与Pfu混合酶
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4楼2010-01-03 19:01:00
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