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xiangao

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】taq-Pfu

用taq 酶在一温度下p一段基因,没有问题而且特异性很好。
但是改成用Pfu酶p这段基因,延伸时间加倍,就是p不出来,而且上下也摸索了几个温度也没p出来,好奇怪啊!!!!Pfu酶本身应该没问题
请帮忙分析原因  !!!!!!!!!!!!!!
纠结中!!!!!!!!!!
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

★
xiangao(金币+1,VIP+0): 1-4 14:12
很正常,特异性高了扩增效率肯定会低的。你可以用一下taq plus,保真性也不错,扩增效率跟taq差不多
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
7楼2010-01-04 08:54:45
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米菲的旋律

木虫 (著名写手)

Always Keep The Faith!

★ ★ ★
xiangao(金币+2,VIP+0):谢谢应助 1-3 18:28
1949stone(金币+1,VIP+0):再奖一次 1-3 19:52
pfu活性较低,延伸速度慢,对溶液要求高。
我曾用过fermentas的pfu,牌子应该是不错了,也没p出来。原因就是模板是手提的,残留不少有害物质。我的解决办法是镁离子浓度。

你可以尝试提高镁离子浓度,(但是注意,镁离子浓度过高,影响pfu特异性)。
物必先腐而后虫生
2楼2010-01-03 18:21:13
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xiangao

金虫 (正式写手)

这样的问题好像不多见 ,,大家遇到过没?
3楼2010-01-03 18:30:13
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
amisking(金币+1,VIP+0): 1-3 19:04
xiangao(金币+1,VIP+0): 1-4 14:13
pfu和pfx的扩增能力就是差点的啦,所以我现在习惯用具有一定保证性的Taq或者Taq与Pfu混合酶
4楼2010-01-03 19:01:00
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